Avaliação in vitro do padrão de morte celular e níveis de citocinas por diferentes cepas da vacina BCG em células mononucleares humanas

• Autor(a) principal: Silva, Andreon Santos Machado da
• Data de Publicação: 2022
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
• Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/61080
• topic: Vacina BCG Moreau RDJ; Vacina BCG Russia; Tuberculose; Morte Celular; Citocinas; Vacina BCG; Tuberculose; Morte Celular; Citocinas

A tuberculose (TB) é a segunda doença infecciosa que mais mata no mundo e sua alta disseminação em países vulneráveis socialmente representa uma preocupação mundial. A vacina BCG é atualmente a única medida profilática contra a TB. Entretanto, ainda pouco se sabe sobre o mecanismo de proteção da vacina BCG contra esta doença. Por mais de 80 anos, o Brasil utilizou a vacina BCG Moreau RDJ. Atualmente, o Brasil adota a vacina BCG Russia em sua campanha de imunização. Porém, esta última nunca foi estudada na população brasileira. Estudos observaram que o padrão de morte celular por apoptose e citocinas relacionadas à proteção podem ser utilizados como marcadores importantes de entendimento da vacina BCG. Sendo assim, o presente estudo teve como objetivo determinar e comparar parâmetros relacionados à resposta imunológica entre as cepas Russia e Moreau RDJ da vacina BCG em um modelo in vitro com células mononucleares humanas de cultura primária e de linhagem. No ensaio de morte celular por citometria de fluxo, os dados mostraram que a cepa BCG Moreau RDJ apresentou altos níveis de apoptose (Anexina-V + /PI- ) e necrose (Anexina-V + /PI+ ), quando comparada a cepa BCG Russia, em THP-1. Porém, nas células mononucleares de sangue periférico (PBMC), não observamos diferença estatística na comparação entre as cepas. Além disso, na PBMC, o ensaio de detecção de citocinas pró-inflamatórias IL-17A, IL-21, IL-22, IL-23, IL-25, IFNγ, sCD-40L e TNF, e anti-inflamatórias IL-4 e IL-33 apresentaram aumentos significativos (p < 0,0001) induzidos pela cepa BCG Moreau RDJ, quando comparados à cepa BCG Russia. Para a linhagem monocítica THP-1, a IL-1β apresentou aumento significativo (p < 0,005) induzido pela cepa BCG Moreau RDJ, quando comparado à cepa BCG Russia. A linhagem THP-1 infectada com o BCG Moreau RDJ apresentou uma correlação forte e positiva entre os níveis de Anexina-V + /PI- e a IL-1β, e uma correlação muito forte e positiva entre Anexina-V + /PI+ e a IL-1β. Por outro lado e em PBMC, a cepa BCG Moreau RDJ mostrou uma correlação forte e negativa entre os níveis de Anexina-V + /PI- e IL-1 β, IL-22, IL-10 e IL-6. Além disso, houve uma correlação forte e positiva, entre os níveis de IL-1β e IL-22, na linha basal e com BCG Russia e BCG Moreau RDJ. A padronização do qRT-PCR para os alvos BAD, BID, BAX, BIM, BCL-xL, MCL 1, NOXA, PUMA e TRAF 2 se mostrou satisfatória, reprodutível e com resultados fidedignos. Os dados do presente estudo evidenciaram que a cepa BCG Moreau RDJ apresentou um perfil mais imunomodulador do que a cepa BCG Russia. Entretanto, mesmo que a cepa BCG Moreau RDJ tenha apresentado estímulos superiores a cepa BCG Russia, ambas as cepas apresentaram perfis semelhantes de indução, quando comparado a expressão basal, exceto para IL-1β na linhagem THP-1