Avaliação da técnica Nested-PCR no diagnóstico de Schistosoma mansoni em caramujos e amostras biológicas humanas

• Autor(a) principal: Wanderley, Leandro Batista
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
• Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/28585
• topic: Schistosoma mansoni; Diagnóstico; Reação em Cadeia de Polimerase; Schistosoma mansoni; Diagnostic; Polymerase Chain Reaction; Esquistossomose mansoni/diagnóstico; Reação em Cadeia da Polimerase/métodos; Schistosoma mansoni/isolamento & purificaçäo; DNA de helmintos/genética; Sensibilidade e Especificidade; Benchmarking/métodos; Estudos de avaliação; Humanos

As técnicas diagnósticas para a esquistossomose apresentam baixa acurácia, tornando-se necessárias novas técnicas para seu diagnóstico. O objetivo do estudo foi avaliar o desempenho de dois sistemas Nested PCR (NPCR) para o diagnóstico de S. mansoni em caramujos e amostras humanas. Foram otimizados quatro ensaios de PCRs simples testando diferentes concentrações de primers e magnésio. Em seguida, esses sistemas foram combinados em duas NPCRs. A sensibilidade dos sistemas foi avaliada nas concentrações entre 1ng e 0,1fg de DNA genômico de S. mansoni e a especificidade com DNA de cercária ave. Nas amostras humanas, a NPCR1 foi avaliada apenas em DNA extraído de amostras de LCR (n=50) de pacientes com ou sem neuroesquistossomose. A NPCR2 foi avaliada em amostras de sangue e urina de indivíduos infectados (n=99) e não infectados (n=21). Para os caramujos, o sistema NPCR2 foi avaliado por mimetismo da infecção em lotes de B. glabrata (n=50), adicionando diferentes concentrações de DNA (1ng, 10pg e 10fg) antes da extração, e através de lotes contendo diferentes quantidades de caramujos infectados em laboratório. A NPCR2 foi cem vezes mais sensível que a NPCR1 amplificando 0,1fg de DNA. Os dois sistemas amplificaram o DNA da cercaria de ave, mas apenas a NPCR2 conseguiu distinção entre as bandas. A NPCR1 apresentou 80% de sensibilidade, 100% de especificidade e valor preditivo positivo, 88% de valor preditivo negativo e 92% de acurácia no LCR. Já a NPCR2 apresentou uma melhor sensibilidade para as amostras de urina, apresentando baixa acurácia no sangue. Para o mimetismo em caramujos, o sistema de NPCR2 amplificou 1ng de DNA, e o lote contendo 1 caramujo com 5 dias de infecção. Conclui-se que a técnica permite o diagnóstico da doença em caramujos e amostras humanas, principalmente em pacientes com neuroesquistossomose.