Infecção de camundongos por Trypanosoma cruzi: alguns aspectos da interação parasito-hospedeiro envolvendo o ácido siálico e a trans-sialidase

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Amor, Ana Lúcia Moreno
Data de Publicação: 2002
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/33995
Resumo: O ácido siálico atua em diversos fenômenos biológicos, podendo exibir um efeito potenciador da infecção de células de mamíferos por T. cruzi in vitre. Células deficientes em ácido siálico são menos infectadas por tripomastigotas de T. cruzi, e esse fenômeno é revertido pela sialilação destas células. Neste trabalho investigou-se o possível papel do ácido siálico na migração do T. cruzi do espaço intravascular e no tropismo desses parasitos a diferentes órgãos. Camundongos BALB/c foram dessialilados com sialidase de Vibrio cho/era antes de infectá-Ios intravenosamente com tripomastigotas. Amostras de sangue foram coletadas e retirados diversos órgãos 48 horas pós-infecção. A parasitemia foi mensurada através de hemocitômetro e o DNA parasitário nos órgãos quantificado através de hibridização com uma sonda marcada com 32p, correspondendo a um segmento de DNA satélite do T. cruzi. A saída dos parasitos da circulação e o tropismo para diferentes tecidos foi semelhante em animais dessialilados ou não. Foi também investigado se trans-sialidases (TS; enzima que transfere ácido siálico de glicoproteínas do hospedeiro para moléculas da membrana parasitária), com ou sem atividade enzimática, ligam-se a tecido cardíaco utilizando-se uma reação de imunoperoxidase. Foram usados como reagentes TS recombinante (ativa, inativa e apresentando apenas o domínio C-terminal) e um anticorpo monoclonal anti-TS. Foi observada coloração do tecido tanto nos cortes incubados com TS ativa quanto com a inativa e ausência de coloração quando incubado com o fragmento correspondendo ao domínio C-terminal da molécula de TS. Nossos achados com a dessialilação sugerem que o ácido siálico não é um ligante envolvido na saída do T. cruzi do compartimento intravascular. A ligação da TS ao coração se dá por sua região catalítica, independendo de atividade enzimática.
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Neste trabalho investigou-se o possível papel do ácido siálico na migração do T. cruzi do espaço intravascular e no tropismo desses parasitos a diferentes órgãos. Camundongos BALB/c foram dessialilados com sialidase de Vibrio cho/era antes de infectá-Ios intravenosamente com tripomastigotas. Amostras de sangue foram coletadas e retirados diversos órgãos 48 horas pós-infecção. A parasitemia foi mensurada através de hemocitômetro e o DNA parasitário nos órgãos quantificado através de hibridização com uma sonda marcada com 32p, correspondendo a um segmento de DNA satélite do T. cruzi. A saída dos parasitos da circulação e o tropismo para diferentes tecidos foi semelhante em animais dessialilados ou não. Foi também investigado se trans-sialidases (TS; enzima que transfere ácido siálico de glicoproteínas do hospedeiro para moléculas da membrana parasitária), com ou sem atividade enzimática, ligam-se a tecido cardíaco utilizando-se uma reação de imunoperoxidase. Foram usados como reagentes TS recombinante (ativa, inativa e apresentando apenas o domínio C-terminal) e um anticorpo monoclonal anti-TS. Foi observada coloração do tecido tanto nos cortes incubados com TS ativa quanto com a inativa e ausência de coloração quando incubado com o fragmento correspondendo ao domínio C-terminal da molécula de TS. Nossos achados com a dessialilação sugerem que o ácido siálico não é um ligante envolvido na saída do T. cruzi do compartimento intravascular. A ligação da TS ao coração se dá por sua região catalítica, independendo de atividade enzimática.The sialic acid acts in several biological phenomena, and it could exhibit an enhancing effect in the invasion of host cells by T. cruzi. Sialylated molecules in the host cells might be important for invasion since mutant cell lines that express less sialic acid are poorly invaded and this is restored by their resialylation. To study the possible role of sialic acid in the migration of the T. cruzi from intravascular space to different tissues, the intravascular space of BALB/c mice was desialylated with sialidase of Vibrio cholera followed by intravenous infection with T. cruzi trypomastigotes. Blood was collected and organs were taken 48 hours post-infection. The parasitemia was measured through hemocytometer and parasitic DNA in the organs quantified through hibridization with a probe labelled with ^^P, corresponding to a T. cruzi satellite DNA segment. The clearance of the parasites from the circulation was identical in mice desialylated or no desialylated. To investigate if the trans-sialidase (TS; enzyme that transfers sialic acid of glycoproteins of the host to molecules of the parasitic membrane) with or without enzymatic activity binds to heart tissue it earned out a immunoperoxidase reaction. When recombinant TS was used (TS active, inactive and the C-terminal domain) and an monoclonal antibody anti-TS, labelling of the tissue was observed in sections incubated with TS active or inactive. Our findings with the mice desialylation demonstrate that the sialic acid is not a ligand involved in the clearence of the T. cruzi of the compartment intravascular and suggest to be involved in the tropism of the parasite for the lung, liver and blood of the vertebrate host. The binding of TS to the heart tissue seems to be through out the catalytic domain, but it doesn't depend on enzymatic activity.CAPESUniversidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil.porCentro de Pesquisas Gonçalo MonizTrypanosoma cruziCamundongosÁcido siálicoÁcido N-AcetilneuramínicoParasitemiaTrypanosoma cruziMouseSialic acidTrans-sialidaseInfecção de camundongos por Trypanosoma cruzi: alguns aspectos da interação parasito-hospedeiro envolvendo o ácido siálico e a trans-sialidaseinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesis2002Coordenação de EnsinoUniversidade Federal da Bahia. Centro de Pesquisas Gonçalo MonizMestrado AcadêmicoSalvador/BAPós-Graduação em Patologiainfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)instname:Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ)instacron:FIOCRUZLICENSElicense.txttext/plain1748https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/33995/1/license.txt8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33MD51ORIGINALAna Lucia Moreno Amor Infecção...2002.pdfAna Lucia Moreno Amor Infecção...2002.pdfapplication/pdf24739044https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/33995/2/Ana%20Lucia%20Moreno%20Amor%20%20Infec%c3%a7%c3%a3o...2002.pdf6bd75bd95cf66c5a5ee717df01613646MD52TEXTAna Lucia Moreno Amor Infecção...2002.pdf.txtAna Lucia Moreno Amor Infecção...2002.pdf.txtExtracted texttext/plain82160https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/33995/3/Ana%20Lucia%20Moreno%20Amor%20%20Infec%c3%a7%c3%a3o...2002.pdf.txt5d933ed5380a324af81039f384587e2aMD53icict/339952019-07-12 02:31:43.707oai:www.arca.fiocruz.br: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Repositório InstitucionalPUBhttps://www.arca.fiocruz.br/oai/requestrepositorio.arca@fiocruz.bropendoar:21352019-07-12T05:31:43Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA) - Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ)false
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