Avaliação da exposição de hepatócitos de Danio rerio ao Bisfenol A

• Autor(a) principal: Gonçalves, Gizielen Rodrigues
• Data de Publicação: 2015
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da FURG (RI FURG)
• Texto Completo: http://repositorio.furg.br/handle/1/7996
• topic: Desruptores Endócrinos; MTT; Vermelho neutro; BPA; ZFL; Endocrine Disruptors; MTT test; Neutral Red test

A introdução de substâncias tóxicas no ambiente pode causar efeitos locais e alterações sistêmicas dos ambientes. Entre estas substâncias estão os desruptores endócrinos (DEs), que são descartados de forma indevida no meio ambiente, e estão presentes no solo e sedimentos onde podem ser causadores de graves problemas aos organismos, incluindo os seres humanos. O bisfenol A (BPA) é um DEs comumente encontrado no ambiente e no corpo humano e provoca efeitos na fertilidade, imunidade, sistema nervoso e comportamento. O fígado é o principal órgão para o metabolismo e detoxificação de BPA, desta forma podendo estar mais exposto aos seus efeitos, e alterações hepáticas podem ser úteis como marcadores que indicam a exposição a estressores ambientais/xenobióticos. A linhagem celular ZFL é derivada de fígados de peixes adultos da espécie Danio rerio, e fornecem um sistema importante para estudos in vitro do efeito de agentes tóxicos em células hepáticas. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da exposição de hepatócitos de Zebrafish a diferentes concentrações de BPA (0,1µg/L; 1µg/L; 10µg/L; 50µg/L), avaliando a viabilidade celular através de três metodologias: teste de exclusão de Azul de Tripan, teste de MTT e teste de incorporação do corante Vermelho Neutro (VN). Pelo método de exclusão do Azul de Tripan comparando-se os tratamentos de BPA no mesmo tempo, foi observado diminuição significativa na viabilidade celular em 30min nas concentrações 10μg/L e 50μg/L, o que não foi observado para os tempos de 24h e 48h. A baixa viabilidade observada no tempo 30 min pode estar relacionada a mecanismos de detoxificação (MXR) que só foram ativados nos tempos de 24h e 48h devido ao curto tempo de exposição, podendo estes mecanismos serem tempo e concentração dependentes em ZFL expostos ao BPA. Pelos métodos de MTT e VN foi observado um aumento significativo ao longo do tempo para todos os tratamentos, provavelmente devido à proliferação celular, entretanto, a concentração 50μg/L de BPA foi estatisticamente menor que os demais tratamentos em 30 min, 24h e 48h (MTT) e 24h e 48h (VN) em relação ao controle, o que pode indicar que as mitocôndrias, e mais tardiamente as membranas lisossomais, sejam alvos mais imediatos do efeito do BPA em ZFL. Pode-se concluir que o BPA induziu efeitos de diminuição de proliferação em ZFL expostas às concentrações 10μg/L e 50μg/L verificado pelos métodos de viabilidade celular analisados, sendo que os testes MTT e VN foram mais sensíveis ao verificar efeitos em maior tempo de exposição.