An??lise automatizada da frequ??ncia de micron??cleos em culturas celulares expostas a agentes genot??xicos f??sicos e quim??cos

• Autor(a) principal: CARVALHO, LUMA R. de
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Dissertação
• Título da fonte: Repositório Institucional do IPEN
• Texto Completo: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/30496
• topic: cell cultures; gene regulation; dna; chelating agents; toxic frequency control; microstructure; substances control acts; physical properties; chemical properties; radiopharmaceuticals; gamma radiation

O ensaio de frequ??ncia de micron??cleos ?? uma t??cnica importante utilizada para avaliar danos genot??xicos de agentes qu??micos ou f??sicos (como radia????o ionizante) em c??lulas, baseado na quantifica????o de c??lulas contendo micron??cleos, que s??o fragmentos derivados de DNA danificado com colora????o semelhante ao dos n??cleos principais, mas com 5 a 30% do seu tamanho. Tradicionalmente, este ensaio ?? realizado usando microscopia de colora????o convencional de acordo com Giemsa, mas atualmente esta t??cnica est?? sendo atualizada para uma abordagem automatizada que se baseia na dissolu????o da membrana plasm??tica por detergentes levando em conta apenas n??cleos e micron??cleos com seu DNA corados por corantes fluorescentes, que pode discriminar n??cleos de c??lulas vi??veis dos das c??lulas invi??veis e permite a contagem por citometria de fluxo. Este trabalho avaliou a extens??o de dano genot??xico radioinduzido por radia????o gama (60Co) em doses entre 0,5 e 16Gy, e o potencial genot??xico de tr??s pept??deos utilizados em medicina nuclear (PSMA-617, PSMA-11 e Ubiquicidina 29-41). As membranas celulares foram lisadas na presen??a dos corantes SYTOX?? Green e EMA, e n??cleos marcados com os dois fluorocromos foram considerados provenientes de c??lulas invi??veis e, portanto, removidos da an??lise. As quantidades de micron??cleos (porcentagem de eventos) nas amostras, foram proporcionais ??s doses de radia????o, e puderam ser ajustadas a um modelo linear-quadr??tico (R2 = 0,993). Somente doses mais altas (8 e 16 Gy) e controles positivos induziram aumentos relevantes nas quantidades de micron??cleos. Os radiof??rmacos foram testados com concentra????es de 0,1x, x, 10x e 100x a concentra????o utilizada em adultos, e n??o induziram dano em concentra????es pratic??veis.