Caracteriza????o da crotamina e seu efeito sobre a contratilidade da musculatura lisa do ducto deferente de rato

• Autor(a) principal: EL-CORAB, MARIANA D.M.K.
• Data de Publicação: 2015
• Tipo de documento: Dissertação
• Título da fonte: Repositório Institucional do IPEN
• Texto Completo: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/28041
• topic: rats; in vitro; muscles; contraction; sympatholytics; drugs; membrane proteins; targets; process development units; autonomic nervous system agents; autonomic nervous system; toxins; venoms; peptides; site characterization; ion exchange chromatography

A crotamina, um pept??deo cati??nico que possui 42 amino??cidos e 4,88 kDa, ?? proveniente do veneno de Crotalus durissus terrificus. Ela apresenta caracter??sticas que permitem sua forte intera????o com alvos moleculares e membranas biol??gicas e assim foi o primeiro pept??deo de veneno a ser classificado como um CPP (cell penetrating peptide), justificando seus importantes efeitos biol??gicos e suas diversas atividades farmacol??gicas. A crotamina ?? descrita por sua atividade miot??xica, tendo como efeito a paralisia e espasmos das patas traseiras de ratos e camundongos. Esse fen??meno ?? descrito por a????es em canais de Na+ e/ou K+ e consequente aumento do influxo intracelular dos n??veis do ??on Ca2+. Estudos a descrevem como um agente despolarizante utilizando a musculatura esquel??tica como modelo experimental. Outra atividade descrita da crotamina ?? um aumento na libera????o basal de acetilcolina (ACh) e dopamina no sistema nervoso central de ratos. At?? o momento, pouco ou nenhum estudo foi realizado em musculatura lisa. A jun????o neuromuscular aut??noma difere em v??rios aspectos importantes da j?? conhecida jun????o neuromuscular esquel??tica. O ducto deferente de rato (DDR), um ??rg??o par e tubular pertencente ?? genit??lia acess??ria masculina, foi utilizado como modelo experimental por ser um dos ??rg??os perif??ricos mais densamente inervados pelo sistema nervoso aut??nomo simp??tico. Esse fato, o torna uma importante ferramenta para estudos que envolvam a neurotransmiss??o e a a????o de drogas adren??rgicas. O objetivo do presente trabalho ?? investigar o efeito da crotamina na contra????o da musculatura lisa. A crotamina foi isolada a partir do veneno de C. d. terrificus por cromatografia de exclus??o molecular seguida de troca i??nica. Os estudos em modelos animais foram realizados utilizando o DD (por????o prost??tica) de ratos Wistar com 5 meses de idade entre 350 g (protocolo CEUA 1261/14). O estudo de neurotransmiss??o foi feito em sistema de ??rg??o isolado (n=6) por estimula????o el??trica transmural com tens??o de 70V, 3ms de dura????o em frequ??ncias de 0,05 (30 min) e 1; 5 10 e 20Hz (30 seg). A contra????o isom??trica foi registrada em gramas de tens??o. Em todos os experimentos a crotamina (0,1;0,5 e 1g/ml) incubada 30 min antes da estimula????o. O efeito m??ximo de contra????o (Emax) do componente f??sico e t??nico foi usado como medida. O componente p??s-sin??ptico foi avaliado por meio de curvas dose-resposta de noradrenalina e dose ??nica de ATP (10-3M) na presen??a ou aus??ncia da crotamina. A diferen??a estat??stica foi avaliada pelo teste-t de student (P0,05). Os ensaios de estimula????o el??trica de baixa frequ??ncia (0,05Hz) revelaram que a crotamina (0,1 e 0,5g/ml) promoveu uma diminui????o da contra????o do DDR (95,7??4,6% e 85,4??5,9%, respectivamente) enquanto que na dose de 1 g/mL de crotamina este efeito n??o foi significativo. Na curva de freq????ncia observamos tamb??m com as mesmas concentra????es de crotamina uma tend??ncia ?? diminui????o da contra????o f??sica e t??nica enquanto que a dose de 1 g/mL promoveu um aumento na contra????o f??sica na freq????ncia de 20,0Hz ((3,2??0,3) em rela????o ao controle (2,2??0,2). O componente p??s-sin??ptico n??o foi alterado pela crotamina conforme evidenciado pela curva concentra????o-resposta de noradrenalina e concentra????o ??nica de ATP. Com base nos resultados obtidos, conclu??mos que a crotamina atua apenas no componente pr??-sin??ptico da contra????o do DDR, provavelmente interferindo na neurolibera????o de ATP e noradrenalina. Ela apresenta um efeito bif??sico, dependendo da dose utilizada, inibindo ou potencializando a resposta, efeito semelhante ao da -defensinas, uma prote??na cuja estrutura se assemelha bastante com a da crotamina.