Avaliacao da radiomarcacao da enexina A5 com tecnecio-99m: influencia do metodo de marcacao nas propriedades fisico-quimicas e biologicas do composto

• Autor(a) principal: SANTOS, JOSEFINA da S.
• Data de Publicação: 2009
• Tipo de documento: Tese
• Título da fonte: Repositório Institucional do IPEN
• Texto Completo: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/9462
• topic: technetium 99; radiopharmaceuticals; labelling; computerized tomography; biological radiation effects; chemical properties; physical properties; in vitro; in vivo; proteins

Anexina A5 (ANXA5) ?? uma prote??na intracelular humana de 36kDa com alta afinidade pela fosfatidilserina que ?? seletivamente externalizada na superf??cie de c??lulas apopt??ticas. A apoptose apresenta um papel importante na fisiologia normal e em numerosos estados patol??gicos. A aplica????o cl??nica da ANXA5 em imagem da apoptose tem sido desenvolvida em oncologia, transplante de ??rg??os e doen??as cardiovasculares. V??rias estrat??gias para radiomarca????o da prote??na t??m sido descritas, incluindo marca????o direta, derivatiza????o com quelante bifuncional (BFC), produ????o de prote??na mutante ou pept??deos an??logos. Muitas t??cnicas de marca????o com 99mTc t??m sido descritas utilizando diferentes n??cleos, tais como [Tc=O]+3, [99mTc]HYNIC, [Tc??N]+2 e [Tc(CO3)]+1. Neste estudo, avaliamos a influ??ncia do n??cleo de 99mTc no comportamento biol??gico e propriedades f??sico-qu??micas da anexina radiomarcada. A radiomarca????o utilizando o n??cleo [Tc??N]+2 foi realizada em duas etapas incluindo a rea????o do 99mTcO4 - com SDH na presen??a de SnCl2 e PDTA para obter o intermedi??rio 99mTcN-SDH, seguida da adi????o de ANXA5. Os resultados obtidos n??o est??o em acordo com a literatura, apesar da alta efici??ncia na produ????o do intermedi??rio. O n??cleo [Tc=O]+3 foi produzido usando a etilenodicisteina 7 (EC) como BFC. Para derivatiza????o empregou-se o TSTU para obter o ??ster succinato correspondente. Diferentes raz??es de ANXA5:EC foram estudadas e todas as condi????es de marca????o resultaram em alta pureza radioqu??mica, por??m diferen??as foram observadas na lipofilicidade, estabilidade, distribui????o biol??gica e afinidade por c??lulas apopt??ticas. A ANXA5-HYNIC tamb??m produziu a prote??na radiomarcada com alta pureza radioqu??mica. A estabilidade das ANXA5 radiomarcadas foi avaliada ap??s incuba????o ?? temperatura ambiente, a 28??C e em incuba????o em soro humano a 37??C. A an??lise destes resultados demonstrou que a ANXA5- EC-99mTc (raz??o 10-2) foi o composto mais est??vel em todas as condi????es estudadas. O ensaio de coeficiente de parti????o demonstrou que os compostos do EC apresentam uma menor lipossolubilidade em rela????o a ANXA5-HYNIC-99mTc. A atividade biol??gica das anexinas radiomarcadas foi avaliada em c??lulas PC-3 com apoptose radioinduzida demonstrando que a ANXA5-EC-99mTc (raz??o 10-2) foi a prote??na com maior porcentagem de liga????o espec??fica. A biodistribui????o in vivo das anexinas radiomarcadas demonstrou uma alta capta????o na regi??o abdominal, especialmente para a ANXA5-HYNIC-99mTc. Os resultados indicam que ANXA5-EC-99mTc (raz??o 10-2) pode ser uma alternativa atrativa para o uso da ANXA5-HYNIC-99mTc em imagem de receptores de fosfatidilserina.