Estudo de marca????o do anticorpo monoclonal anti-PBP2a com sup(99m)Tc

• Autor(a) principal: MORORO, JANIO da S.
• Data de Publicação: 2012
• Tipo de documento: Dissertação
• Título da fonte: Repositório Institucional do IPEN
• Texto Completo: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/10164
• topic: staphylococcus; microorganisms; labelling; monoclonal antibodies; technetium 99

Staphylococcus aureus ?? um dos principais microorganismos causadores de infec????o em humanos, podendo causar inclusive bacteremia e endocardite nos indiv??duos infectados. Diversas cepas desta bact??ria apresentam resist??ncia a diferentes tipos de antibi??ticos, dentre eles os antibi??ticos meticilina e amoxicilina, como no caso da bact??ria Staphylococcus aureus resistente ?? meticilina (MRSA). A Prote??na ligadora de Penicilina 2a (PBP2a) ?? a enzima respons??vel por conferir resist??ncia para a MRSA aos antibi??ticos β-lact??micos, sendo uma mol??cula promissora para terapia com AcM. No entanto, al??m das terapias os m??todos de diagn??stico tamb??m s??o ineficientes, pois atualmente o diagn??stico leva v??rios dias para produzir um resultado confi??vel. O objetivo deste trabalho foi desenvolver um radiof??rmaco utilizando o AcM anti-PBP2a, desenvolvido em Bio-Manguinhos/FioCruz, marcado com 99mTc, para identifica????o in situ do foco infeccioso causado por MRSA. Neste trabalho, incialmente o AcM anti-PBP2a foi reduzido com o agente redutor 2-mercaptoetanol (2-ME), para gerar grupos sulfidrilas (- SH). Logo ap??s foram utilizados dois diferentes m??todos da Marca????o Direta: o M??todo 1, utilizando o reagente tartarato e o ??cido gent??sico, que atuam como agente transquelante e estabilizador, respectivamente; e o M??todo 2, utilizando um kit comercial de MDP, no qual o MDP atua como agente transquelante. Ap??s a marca????o do anticorpo, o radiof??rmaco foi submetido a ensaios de avalia????o funcional, utilizando os m??todos de eletroforese em gel SDS-PAGE n??o redutor; Immunoblotting; ELISA e o Ensaio de Neutraliza????o in vitro. Como resultado foi visto que a quantidade m??dia de grupos sulfidrilas produzida por AcM foi considerada satisfat??ria, cerca de 5 grupos SH por IgG, utilizando para isto a rela????o molar de 6.500:1 de 2-ME:AcM. O M??todo 2 foi o m??todo que obteve melhor rendimento de marca????o, com 73,5%, apresentando boa estabilidade depois de 2 horas (73,2%). A melhor formula????o utilizada foi a seguinte: 0,5 mg de AcM anti-PBP2a; 10 μL do kit do MDP, depois de ser resuspendido com 5 mL de solu????o salina; e 75,48 MBq (2,04 mCi) de 99mTc, a rea????o ocorrendo em 15 minutos. Os Ensaios de Avalia????o Funcional demonstraram que o AcM manteve a especificidade e afinidade de liga????o ?? PBP2a.