Avalia????o in vitro e in vivo do impacto do silenciamento do gene NF-kB1 no ciclo celular, capacidade proliferativa e na radiossensibilidade do adenocarcinoma renal

• Autor(a) principal: IKEGAMI, AMANDA
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Dissertação
• Título da fonte: Repositório Institucional do IPEN
• Texto Completo: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/29893
• topic: gene recombination proteins; antigen-antibody reactions; cell cycle; cell proliferation; symptoms signs; carcinomas; kidneys; urogenital system diseases; in vivo; in vitro; rna polymerases; targets; therapeutic uses; radiation doses; radiation effects; radiosensitivity; comparative evaluations

O carcinoma de c??lulas renais (CCR) ?? respons??vel por, aproximadamente, 1 a 3% das neoplasias malignas humanas e, dentre os tumores urol??gicos, ?? o mais agressivo. A heterogeneidade biol??gica, a resist??ncia aos f??rmacos e os efeitos colaterais ?? quimioterapia s??o os maiores obst??culos ao tratamento eficaz do CCR. V??rias mol??culas v??m sendo correlacionadas com o fen??tipo agressivo deste tumor, sendo uma delas o fator de transcri????o NF-kB. Estudos demonstraram a ativa????o de NF-kB no CCR e muitos apontaram NF-kB1 (p50) como uma mol??cula importante na progress??o tumoral e met??stase. Neste trabalho, foi utilizada a t??cnica de silenciamento g??nico de interfer??ncia por RNA - Short hairpin RNA (shRNA) - para diminuir a express??o de NF-kB1 em c??lulas murinas de carcinoma de c??lulas renais (Renca). Verificou-se que, in vitro, a diminui????o da express??o do gene NF-kB1 reduz a capacidade proliferativa das c??lulas Renca e aumenta a taxa de apoptose tardia/necrose e a quantidade de c??lulas na fase G2/M do ciclo celular. Al??m disso, as an??lises de Western blot revelaram aumento significativo da express??o proteica de Ciclina B1 e Bax. A regula????o negativa da p50 tamb??m alterou a capacidade clonog??nica das c??lulas que, conjugada ?? irradia????o ionizante, levou ?? diminui????o significativa da fra????o de sobreviv??ncia das c??lulas Renca e diminuiu a viabilidade celular verificada atrav??s do ensaio de MTS. Os ensaios in vivo mostraram que as c??lulas com baixa express??o de NF-kB1 (Renca-shRNA- NF-kB1) apresentam tumorigenicidade significativamente menor que as c??lulas controle e as an??lises de imunohistoqu??mica mostraram aumento significativo das ??res necr??ticas dos tumores Renca-shRNA-NF-kB1, al??m da diminui????o da marca????o de Ki-67, um marcador de prolifera????o celular. Os resultados indicam que a diminui????o da express??o de NF-kB1 pode suprimir a tumorig??nese do CCR, induzindo apoptose tardia/necrose, podendo ser um potencial alvo terap??utico para este carcinoma.