Identificação molecular e análise do padrão de expressão tecidual dos genes relacionados às sirtuínas em zebrafish

• Autor(a) principal: Pereira, Talita Carneiro Brandão
• Data de Publicação: 2010
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da PUC_RS
• Texto Completo: http://tede2.pucrs.br/tede2/handle/tede/5372
• topic: BIOLOGIA MOLECULAR; TELEÓSTEOS; EXPRESSÃO GÊNICA; ENZIMAS; ENVELHECIMENTO; ANIMAIS - EXPERIÊNCIAS; CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOLOGIA GERAL

Descobertas inicialmente em Saccharomyces cerevisie como reguladoras de silenciamento de informação (SIRs), as sirtuínas (SIRTs) estão amplamente distribuídas em todos os domínios de vida. Esta grande e diversa família de histonas desacetilases da classe III (HDACs) são dependentes de nicotinamida adenina dinucleotídeo (NAD+) para exercer suas funções de desacetilação e/ou transferência de mono-ADP-ribosil. São consideradas uma família de enzimas bastante conservada não apenas entre eucariotos, nos quais são encontradas múltiplas sirtuínas, mas também em procariotos. O zebrafish (Danio rerio) é um teleósteo de água doce amplamente utilizado como animal modelo em diferentes áreas de pesquisa. Características como manutenção em pequenos espaços e com baixos custos, fácil administração de drogas solúveis em água e rápida aclimatação a novos ambientes, tornaram o zebrafish modelo de estudo para várias doenças humanas; entre elas as relacionadas ao envelhecimento. Apesar do uso crescente do zebrafish como sistema modelo, e das sirtuínas serem importantes alvos de pesquisa nos últimos anos principalmente devido seu potencial terapêutico, pouco é conhecido sobre sirtuínas e zebrafish. Portanto, identificar genes relacionados às sirtuínas e caracterizar o padrão de expressão gênica de cada membro em diferentes tecidos do zebrafish foi o objetivo deste trabalho. Para tanto, amostras de diferentes tecidos foram retiradas de animais adultos de ambos sexos e diretamente congeladas em nitrogênio líquido. Após a extração de RNA total de cada amostra, reações de RT-PCR, já padronizadas, foram realizadas para análise do padrão de expressão dos genes relacionados às sirtuínas, identificados previamente através de buscas no NCBI-Blast. Nossa investigação identificou oito genes relacionados às sirtuínas, incluindo dois parálogos. Cada um dos oito genes identificados apresentou um padrão de expressão único, ilustrando ampla distribuição tecidual dos membros da família das sirtuínas. Com o objetivo de testar a modulação na expressão destes genes, realizamos um experimento de exposição ao resveratrol que alterou os níveis de expressão gênica de algumas das sirtuínas. Neste sentido, propomos que novas drogas potencialmente moduladoras de sirtuínas sejam testadas usando o sistema aqui descrito com o objetivo de, no futuro, desenvolver terapias mais seletivas para as doenças associadas ao envelhecimento.