Uma abordagem metabolómica no diagnóstico da tuberculose

• Autor(a) principal: CONDE, Ricardo Diogo Alves
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10362/20060
• topic: Ciências biomédicas; Biologia molecular; Tuberculose; Mycobacterium tuberculosis; Metabolómica; NMR; Domínio/Área Científica::Ciências Médicas

Este trabalho teve como foco principal a identificação de potenciais biomarcadores para o diagnóstico da tuberculose, utilizando uma abordagem metabolómica. Estudos de metabolómica utilizando amostras de biofluidos são hoje em dia muito comuns na descoberta de biomarcadores para diagnóstico de doenças, além de auxiliarem na compreensão dos seus mecanismos patológicos. A tuberculose tornou-se uma doença emergente a nível mundial, sendo uma das principais causas de morte. Mycobacterium tuberculosis é o agente patogénico responsável pela tuberculose. Neste sentido, foram adquiridos espectros de 1H NMR de amostras de soro sanguíneo de indivíduos saudáveis e de pacientes com tuberculose, utilizando um espectrómetro de NMR de 800 MHz. A aquisição de espectros foi realizada após a otimização do protocolo de preparação de amostras de soro. Para isso, verificou-se qual a melhor sequência de pulsos a ser utilizada (CPMG ou NOESY), qual o efeito da ultrafiltração no perfil dos espectros e determinou-se a estabilidade da amostra. A abordagem metabolómica utilizada neste estudo envolveu uma análise do perfil metabólico e uma análise fingerprinting das amostras de soro. A identificação e quantificação dos metabolitos foi efetuada com o software Chenomx NMR Suite 8.1. A identificação foi auxiliada por bases de dados e espectros de NMR bidimensionais. Após a identificação/quantificação dos metabolitos procedeu-se á análise estatística. Para os dados obtidos a partir da análise do perfil metabólico foi realizada uma análise uni e multivariada dos dados. No caso da análise fingerprinting apenas se procedeu à realização da análise multivariada. Os resultados das duas análises foram similares, identificando os mesmos metabolitos responsáveis pela discriminação dos grupos experimentais (controlos e doentes). Foram encontrados em maiores concentrações no soro de indivíduos com tuberculose intermediários de nucleosídeos (hipoxantina e inosina), glícidos (manose e glucose), aminoácidos (ornitina, glutamato, serina e aspartato) e ácidos orgânicos (lactato). Já aminoácidos como a asparagina, a metionina, a cisteína, a lisina e a π-metilhistidina, e ácidos orgânicos, como o 3-hidroxisobutirato e o citrato, foram encontrados em menores concentrações no soro dos indivíduos com tuberculose. A partir destes resultados verificou-se que os principais processos alterados com reflexo nos níveis metabólicos do soro de doentes, estavam relacionados com a biossíntese de proteínas, com a reciclagem de amónia, com o metabolismo do aspartato e com o metabolismo da metionina. Os resultados obtidos neste estudo corroboram outros estudos já publicados