Papel das regiões C2-V3-C3 na indução de anticorpos neutralizantes anti-VIH-2
Autor(a) principal: | |
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Data de Publicação: | 2016 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) |
Texto Completo: | http://hdl.handle.net/10362/19070 |
Resumo: | A Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (SIDA) é uma doença grave que se caracteriza pela destruição ou pelo desaparecimento de reações imunitárias do organismo, que permitem o surgimento de infeções oportunistas que podem levar à morte. O agente etiológico responsável pela SIDA é o Vírus da Imunodeficiência Humana (VIH) e existem dois tipos: o tipo 1 (VIH-1) e o tipo 2 (VIH-2). Quando comparados, o VIH-2 tem uma taxa de transmissão menor e uma progressão da doença mais lenta, o que faz com que os indivíduos infetados tenham um melhor prognóstico. Um dos fatores importantes nesta resposta imunológica é a presença de anticorpos neutralizantes (nAbs) e a pouca capacidade do VIH-2 na evasão a esta resposta. Os nAbs têm a capacidade de inibir a entrada do vírus nas células, através da sua ligação a regiões específicas presentes nas glicoproteínas do invólucro viral. A região V3 do domínio C2V3C3 existente na glicoproteína de superfície do invólucro do VIH-2 é um dos alvos preferenciais dos nAbs. No entanto, desconhece-se ainda de que forma as regiões adjacentes, C2 e C3, contribuem para uma resposta neutralizante. Este estudo teve como objetivos caracterizar o impacto das regiões C2, V3 e C3 na resposta de anticorpos não neutralizantes e neutralizantes na infeção por VIH-2. Para isso, recorreu-se à produção de péptidos recombinantes correspondentes a cada uma das regiões referidas anteriormente através da transformação e crescimento de bactérias competentes E. coli TOP10 com plasmídios clonados com fragmentos de ADN das regiões C2, V3 e C3, respetivamente. Após a sua produção, os péptidos recombinantes foram purificados por Fast Protein Liquid Chromatography (FPLC) e utilizados como antigénios em imunoensaios (ELISA), para estudar a reatividade de cada um dos péptidos com um painel de soros positivos para VIH-2. Observou-se maior serorreatividade contra o péptido recombinante V3 (prV3), seguido do prC3 e do prC2. Foram feitas correlações entre os valores obtidos neste estudo e valores obtidos em estudo realizado anteriormente sobre a potência da neutralização dos anticorpos (IC50) presentes em alguns dos soros utilizados. Verificou-se que não havia associação entre a neutralização e a serorreatividade contra cada região, o que pode indicar que os anticorpos neutralizantes produzidos por indivíduos infetados pelo VIH-2 não são específicos para nenhuma das respetivas regiões. No entanto, o número elevado de casos de serorreatividade pode ser indicativo de que as 3 regiões em conjunto possam ser responsáveis pela indução de anticorpos neutralizantes específicos para o domínio C2V3C3, tal como já foi observado anteriormente. |
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Papel das regiões C2-V3-C3 na indução de anticorpos neutralizantes anti-VIH-2Parasitologia MédicaCiências biomédicasSidaAnticorposBiologia molecularInfeção VIH-2,Região C2V3C3Anticorpos neutralizantesDomínio/Área Científica::Ciências MédicasA Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (SIDA) é uma doença grave que se caracteriza pela destruição ou pelo desaparecimento de reações imunitárias do organismo, que permitem o surgimento de infeções oportunistas que podem levar à morte. O agente etiológico responsável pela SIDA é o Vírus da Imunodeficiência Humana (VIH) e existem dois tipos: o tipo 1 (VIH-1) e o tipo 2 (VIH-2). Quando comparados, o VIH-2 tem uma taxa de transmissão menor e uma progressão da doença mais lenta, o que faz com que os indivíduos infetados tenham um melhor prognóstico. Um dos fatores importantes nesta resposta imunológica é a presença de anticorpos neutralizantes (nAbs) e a pouca capacidade do VIH-2 na evasão a esta resposta. Os nAbs têm a capacidade de inibir a entrada do vírus nas células, através da sua ligação a regiões específicas presentes nas glicoproteínas do invólucro viral. A região V3 do domínio C2V3C3 existente na glicoproteína de superfície do invólucro do VIH-2 é um dos alvos preferenciais dos nAbs. No entanto, desconhece-se ainda de que forma as regiões adjacentes, C2 e C3, contribuem para uma resposta neutralizante. Este estudo teve como objetivos caracterizar o impacto das regiões C2, V3 e C3 na resposta de anticorpos não neutralizantes e neutralizantes na infeção por VIH-2. Para isso, recorreu-se à produção de péptidos recombinantes correspondentes a cada uma das regiões referidas anteriormente através da transformação e crescimento de bactérias competentes E. coli TOP10 com plasmídios clonados com fragmentos de ADN das regiões C2, V3 e C3, respetivamente. Após a sua produção, os péptidos recombinantes foram purificados por Fast Protein Liquid Chromatography (FPLC) e utilizados como antigénios em imunoensaios (ELISA), para estudar a reatividade de cada um dos péptidos com um painel de soros positivos para VIH-2. Observou-se maior serorreatividade contra o péptido recombinante V3 (prV3), seguido do prC3 e do prC2. Foram feitas correlações entre os valores obtidos neste estudo e valores obtidos em estudo realizado anteriormente sobre a potência da neutralização dos anticorpos (IC50) presentes em alguns dos soros utilizados. Verificou-se que não havia associação entre a neutralização e a serorreatividade contra cada região, o que pode indicar que os anticorpos neutralizantes produzidos por indivíduos infetados pelo VIH-2 não são específicos para nenhuma das respetivas regiões. No entanto, o número elevado de casos de serorreatividade pode ser indicativo de que as 3 regiões em conjunto possam ser responsáveis pela indução de anticorpos neutralizantes específicos para o domínio C2V3C3, tal como já foi observado anteriormente.Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS) is a severe disease characterized by destruction or disappearance of the immune reactions of the organism, wich enables the appearance of opportunistic infections that can lead to death. The etiological agent responsible for AIDS is the Human Immunodeficiency Virus (HIV) and there are two types: type 1 (HIV-1) and type (HIV-2). When compared, HIV-2 has a lower transmission rate and a slower progression of the disease, which causes the infected individuals to have a better prognosis. One of the important factors in this immune response is the presence of neutralizing antibodies (nAbs) and the limited capacity of HIV-2 to escape. The nAbs have the ability to inhibit viral entry into cells, through its binding to specific regions present in the viral envelope glycoproteins. The V3 region existing in C2V3C3 domain present on surface glycoprotein of HIV-2 envelope is the main target of nAbs. However, it is still unknown how the adjacent regions, C2 and C3, contribute to a neutralizing response. This study aimed to characterize the impact of the regions C2, V3 and C3 in non-neutralizing and neutralizing antibody response in infection by HIV-2. Therefore, recombinant peptides were produced corresponding to each of the regions mentioned above by transformation and growth of competent bacteria E. coli TOP10 with plasmids cloned with DNA fragments of the C2, V3 and C3 regions, respectively. After their production, the recombinant peptides were purified by Fast Protein Liquid Chromatography (FPLC) and used as antigens in imunoassays (ELISA) to study the reactivity of each peptide with a panel of positive sera for HIV-2. It was observed a higher serorreactivity against recombinant peptide V3 (prV3), followed by prC3 and prC2. Correlations were made between the values obtained in this study and values obtained in a previous study about the potency of neutralizing antibodies (IC50) present in some of the used sera. It was found that there was no association between the neutralization and serorreactivity against each region, which may indicate that neutralizing antibodies produced by individuals infected with HIV-2 are not specific for any of the respective regions. However, the large number of cases of serorreactivity may be indicative that the three regions together may be responsible for the induction of neutralizing antibodies specific for C2V3C3 domain, as noted earlier.Instituto de Higiene e Medicina TropicalMARCELINO, JoséCUNHA, CelsoRUNALMEIDA, Débora Joana Rodrigues Lopes de2018-02-19T01:30:16Z201620162016-01-01T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10362/19070TID:201134110porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2024-03-11T03:59:02Zoai:run.unl.pt:10362/19070Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-20T03:25:15.065182Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse |
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A Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (SIDA) é uma doença grave que se caracteriza pela destruição ou pelo desaparecimento de reações imunitárias do organismo, que permitem o surgimento de infeções oportunistas que podem levar à morte. O agente etiológico responsável pela SIDA é o Vírus da Imunodeficiência Humana (VIH) e existem dois tipos: o tipo 1 (VIH-1) e o tipo 2 (VIH-2). Quando comparados, o VIH-2 tem uma taxa de transmissão menor e uma progressão da doença mais lenta, o que faz com que os indivíduos infetados tenham um melhor prognóstico. Um dos fatores importantes nesta resposta imunológica é a presença de anticorpos neutralizantes (nAbs) e a pouca capacidade do VIH-2 na evasão a esta resposta. Os nAbs têm a capacidade de inibir a entrada do vírus nas células, através da sua ligação a regiões específicas presentes nas glicoproteínas do invólucro viral. A região V3 do domínio C2V3C3 existente na glicoproteína de superfície do invólucro do VIH-2 é um dos alvos preferenciais dos nAbs. No entanto, desconhece-se ainda de que forma as regiões adjacentes, C2 e C3, contribuem para uma resposta neutralizante. Este estudo teve como objetivos caracterizar o impacto das regiões C2, V3 e C3 na resposta de anticorpos não neutralizantes e neutralizantes na infeção por VIH-2. Para isso, recorreu-se à produção de péptidos recombinantes correspondentes a cada uma das regiões referidas anteriormente através da transformação e crescimento de bactérias competentes E. coli TOP10 com plasmídios clonados com fragmentos de ADN das regiões C2, V3 e C3, respetivamente. Após a sua produção, os péptidos recombinantes foram purificados por Fast Protein Liquid Chromatography (FPLC) e utilizados como antigénios em imunoensaios (ELISA), para estudar a reatividade de cada um dos péptidos com um painel de soros positivos para VIH-2. Observou-se maior serorreatividade contra o péptido recombinante V3 (prV3), seguido do prC3 e do prC2. Foram feitas correlações entre os valores obtidos neste estudo e valores obtidos em estudo realizado anteriormente sobre a potência da neutralização dos anticorpos (IC50) presentes em alguns dos soros utilizados. Verificou-se que não havia associação entre a neutralização e a serorreatividade contra cada região, o que pode indicar que os anticorpos neutralizantes produzidos por indivíduos infetados pelo VIH-2 não são específicos para nenhuma das respetivas regiões. No entanto, o número elevado de casos de serorreatividade pode ser indicativo de que as 3 regiões em conjunto possam ser responsáveis pela indução de anticorpos neutralizantes específicos para o domínio C2V3C3, tal como já foi observado anteriormente. |
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