Construção de um env quimérico HIV-1 / HIV-2

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Figueiredo, Inês Brito
Data de Publicação: 2014
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10400.26/13046
Resumo: Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Superior de Ciências da Saúde Egas Moniz
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spelling Construção de um env quimérico HIV-1 / HIV-2VIH-1VIH-2Anticorpos neutralizantesEnv quiméricoDissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Superior de Ciências da Saúde Egas MonizIntrodução: O Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (SIDA) representa, a nível mundial, um dos principais problemas de saúde pública. O agente etiológico responsável por esta pandemia é o Vírus da Imunodeficiência Humana (VIH), que afeta 35 milhões de pessoas em todo o mundo. Objetivos: Construção dum env quimérico contendo a região C2, V3 e C3 do VIH-2 e as restantes do VIH-1 e reconstrução da sequência utilizada no ensaio clínico RV144 (gp120 da CRF_01_AE com uma porção da gp41 dum subtipo B (LAI)), onde a região C2, V3 e C3 do VIH-1 foi substituída pela homóloga do VIH-2. Os dois envs serão testados quando à sua capacidade de indução de anticorpos amplamente neutralizantes contra o VIH-1 e o VIH-2. Metodologia: Para a amplificação tanto da região C2V3C3 do VIH-2 como do env do VIH-1, procedeu-se à escolha de primers que reuniam as condições ideais para a correta concretização do processo. Recorreu-se à técnica de PCR (Reação de Polimerização em Cadeia) para a amplificação de cada região e à técnica de eletroforese para a confirmação de que os fragmentos correspondentes às regiões em estudo (593pb para a C2V3C3 e 1190pb para o megaprimer) foram efetivamente amplificados. Com recurso ao programa MEGA6, foi possível, não só a substituição da região C2V3C3 do VIH-1 pela mesma região do VIH-2, como a confirmação de que a proteína final seria funcional. Resultados: Foi possível a correta amplificação da região C2V3C3 do env do VIH-2, observando-se um fragmento de 593pb, confirmando o sucesso do processo de amplificação e da escolha apropriada dos primers utilizados. Todavia, tornou-se impossível a amplificação do megaprimer. Conclusão: Neste projeto, verificou-se a correta amplificação da região C2V3C3 do env do VIH-2. No entanto, tornou-se impossível amplificar o megaprimer. É, contudo, de considerar, a desafiante e inovadora estratégia introduzida, com o prepósito de analisar, em ratinhos, a resposta em anticorpos de ligação contra a gp120 do VIH-1 e VIH-2 e a resposta em anticorpos de neutralização para o VIH-1 e VIH-2.Barroso, Maria HelenaRepositório ComumFigueiredo, Inês Brito2016-04-11T13:18:05Z2014-10-01T00:00:00Z2014-10-01T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10400.26/13046201098547porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2022-10-06T14:52:01Zoai:comum.rcaap.pt:10400.26/13046Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-19T15:07:13.383109Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
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