Análise de sulfonamidas no mel: validação e optimização de um método de HPLC-fluorescência

• Autor(a) principal: Correia, Daniela M.
• Data de Publicação: 2008
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10198/1000
• topic: Mel; Método de HPLC; Sulfonamidas; Métodos de detecção; Identificação das sulfonamidas; Método CHARM II

Os antibióticos são usados no tratamento de abelhas com o intuito de combater infecções associadas às doenças da Loque Americana e Loque Europeia que atacam as larvas das abelhas levando à destruição da colmeia. As sulfonamidas são um dos grupos de antibióticos mais usados pelos apicultores. Como a Legislação Europeia, proíbe a comercialização do mel na presença de quaisquer resíduos de antibióticos, a implementação de métodos analíticos que permitam a detecção e quantificação destes resíduos afigura-se uma tarefa fundamental. O presente trabalho teve como objectivo a optimização, validação e aplicação de um método de HPLC, com detector de fluorescência e derivatização pré-coluna, para a análise de 11 sulfonamidas em amostras de mel: sulfatiazol, sulfamerazina, sulfametazina, sulfametizol, sulfametoxipiridazina, sulfisoxazol, sulfadoxina, sulfametoxazol, sulfadimetoxina, sulfaquinoxalina e sulfameter (padrão interno). O método de calibração usado foi o de sobreposição de matriz de mel com padrão interno. A separação foi efectuada numa coluna de fase reversa à temperatura de 32 ºC em modo de gradiente usando 2 eluentes preparados com diferentes proporções de tampão acetato (pH 4,0) e acetonitrilo. O tempo da corrida foi de 40 minutos. Os comprimentos de onda de excitação e de emissão usados foram 405 nm e 495 nm, respectivamente. A extracção de sulfonamidas das amostras de mel ou de soluções padrão de sulfonamidas com sobreposição de matriz de mel foi efectuada em SPE-C18, após um passo de hidrólise para quebra das ligações entre sulfonamidas e açúcares. Foram efectuadas calibrações usando soluções padrão de calibração de matriz de mel “claro” e de mel “escuro”, atendendo aos efeitos de matriz de mel obtidos nas sensibilidades das medições analíticas de algumas sulfonamidas. A linearidade do método para cada sulfonamida foi testada no intervalo de concentrações de 1-100 μg/L. Foi compensado o efeito de matriz pelo uso do método de sobreposição de matriz e da sulfonamida sulfameter como padrão interno. Os limites de detecção e quantificação para cada uma das sulfonamidas analisadas foram da ordem dos 0,4-3 μg/kg e 1-9 μg/kg de mel, respectivamente. O método de HPLC apresentou repetibilidade e precisão intermédia aceitáveis (CV em geral, inferiores a 5,0% e 15%, respectivamente). A exactidão do método foi aferida recorrendo a ensaios de recuperação, tendo-se obtido percentagens de recuperação entre 70-120%. Este método foi aplicado na detecção e quantificação de resíduos de antibióticos em amostras de mel após classificação da cor da amostra em mel “claro” ou mel “escuro”, e os resultados foram comparados com os obtidos pelo método qualitativo CHARM II (método aprovado pelo US-FDA para a análise de resíduos em mel).