Desenvolvimento de um imunossensor eletroquímico para a análise de um alergénio alimentar

• Autor(a) principal: Guimarâes, Duarte Jorge Magalhâes
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10400.22/23608
• topic: Alergia alimentar; Aipo; Api g 1; Cronoamperometria; Imunossensor eletroquímico; SPCE; Celery; Chronoamperometry; Electrochemical immunosensor; Food allergy

A alergia ao aipo pode ocorrer através da inalação ou do contacto direto ou indireto com o alimento, podendo levar a consequências graves no organismo, como por exemplo urticárias, falta de ar e inchaço na garganta e/ou em casos mais severos, choque anafilático. Por este motivo, é importante desenvolver métodos que permitam a deteção e quantificação do alergénio em amostras alimentares. Técnicas analíticas com capacidade de deteção rápida podem contribuir para o controlo dos rótulos de produtos alimentares, garantindo que indivíduos com hipersensibilidade possam consumir alimentos sem que ocorram reações indesejáveis. O objetivo deste trabalho consistiu no desenvolvimento de um imunossensor eletroquímico, em formato sandwich, para a análise de um alergénio do Aipo (Api g 1) em amostras alimentares comerciais. Foram utilizados elétrodos serigrafados de carbono (SPCE, transdutor) que foram biomodificados com um anticorpo de captura (CAb, biorecetor). Posteriormente, o alergénio foi incubado juntamente com um anticorpo de deteção biotinilado (DAb), seguindo-se a incubação da enzima peroxidase conjugada com estreptavidina (HRP-Strep) e subsequente adição do substrato enzimático 3,3’,5,5’- tetrametilbenzidina (TMB-H2O2), obtendo-se o sinal eletroquímico por cronoamperometria. O tempo total do ensaio foi de 1h45min. Foram efetuadas otimizações das condições experimentais (i.e., das concentrações do CAb, do DAb e da HRP-Strep, dos tempos de incubação e do formato de ensaio) que permitiram obter as melhores condições de análise. As principais características do imunosensor, em termos do desempenho analítico, foram: linearidade entre 50 a 4000 ng/mL, limite de deteção de 45 ng/mL, limite de quantificação de 151 ng/mL e coeficiente de variação de 4,7% (o que indica uma boa precisão). Confirmou-se a seletividade do sensor através da análise de outros alergénios alimentares (peixe, crustáceos, ovo, amendoim), que também revelaram não interferir na análise. Foi efetuado o estudo de recuperação, utilizando uma amostra alimentar, tendo sido obtidas percentagens que variaram entre 95% e 115%, o que demonstrou a exatidão dos resultados. Avaliou-se a estabilidade do sensor durante 6 semanas consecutivas, observando-se que neste período a plataforma desenvolvida respondia de forma efetiva. Deste modo, é possível preparar, biomodificar e armazenar o transdutor durante várias semanas, permitindo a redução do consumo de reagentes e soluções e do tempo necessário para a sua preparação. A aplicabilidade do imunossensor foi avaliada através da análise de 20 amostras alimentares comerciais, que contemplaram as seguintes: 1 amostra cujo rótulo menciona “contém 3% de aipo”, 3 amostras cujos rótulos referem “contém aipo”, 3 amostras que “pode conter”, e 7 amostras que não contêm qualquer vestígio de aipo. Para além destas, foram analisadas 6 amostras de aipo (folha, caule e raiz, de aipo fresco e de aipo congelado), tendo sido analisado o efeito do processo de congelação do alimento para uma melhor compreensão da sua influência na conservação do alergénio. A deteção e quantificação do alergénio foram efetuadas com sucesso e os resultados obtidos demonstraram que os rótulos dos produtos se encontraram em conformidade com a legislação europeia (Regulamento (UE) n.o 1169/2011), determinando também que o imunossensor desenvolvido poderá ter utilidade prática para consumidores e indústrias alimentares.