Segurança alimentar e controlo de qualidade de produtos comerciais: imunossensor amperométrico para a quantificação do alergénio do ovo

• Autor(a) principal: Rio, Mariana Sofia Aguiar Coque Moura Del
• Data de Publicação: 2022
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10400.22/21102
• topic: Biossensor Eletroquímico; Imunossensor; Alergénios; Alergia alimentar; Amperometria; Legislação; Ovotransferrina; Ovo; Clara de ovo; Produtos alimentares; Rotulagem; SPCE; Elétrodo serigrafado de carbono; Electrochemical Biosensor; Imunosensor; Allergens; Food allergy; Amperometry; Legislation; Ovotransferrin; Egg; Egg White; Food products; Labelling

O ovo é um alimento vastamente consumido pela população, sendo principalmente constituído por clara e gema, as quais contêm diferentes alergénios alimentares. A alergia ao ovo afeta cerca de 9 % das crianças a nível mundial, sendo que a clara apresenta maior teor de alergenicidade do que a gema. Indivíduos com hipersensibilidade podem apresentar sintomas e/ou reações que variam de moderadas a severas, sendo que em casos extremos podem levar a urgência médica. Devido à inexistência de tratamento para esta alergia alimentar, a prevenção decorre da não ingestão de alimentos que contêm o alergénio. Deste modo, torna-se essencial o cumprimento da legislação em vigor que refere a obrigatoriedade da indicação no rótulo do produto da presença de gema e/ou clara de ovo. Ovotransferrina (Gal d 3) é um importante alergénio da clara de ovo sendo o analito-alvo deste estudo que consistiu no desenvolvimento de um imunossensor amperométrico para o seu controlo em produtos alimentares comerciais. Elétrodos serigrafados de carbono (SPCE) foram selecionados como plataforma transdutora e anticorpos anti-Gal d 3 como biorecetor. Num ensaio não-competitivo (sandwich), o anticorpo de captura (CAb) foi imobilizado na superfície do elétrodo de trabalho do SPCE por adsorção física, seguindo-se o reconhecimento do alergénio através do anticorpo de deteção modificado com a enzima peroxidase (DAb-HRP) e subsequente adição do substrato enzimático tetramethylbenzidine (TMB). Posteriormente o sinal analítico foi obtido utilizando a amperometria como técnica eletroquímica. Foi efetuado um conjunto de otimizações (nanoestruturação do elétrodo, concentrações das biomoléculas, tempos de incubação, etc.), que resultou num ensaio de 30 min e permitiu obter um notável desempenho analítico; o imunossensor desenvolvido permitiu a quantificação de Gal d 3 entre 55 e 1000 ng/mL, sendo obtido um limite de deteção de 16 ng/mL. O coeficiente de variação do método (Vx0 = 5,5 %) demonstrou uma boa precisão do método desenvolvido. Analisaram-se 25 amostras alimentares que incluíram produtos cuja rotulagem indica “não contém ovo”, “pode conter vestígios de ovo”, “contém ovo” e/ou “contém clara de ovo”. Para além destas, 7 amostras de ovo e clara de ovo cru(as) e/ou cozinhado(as) foram analisadas e quantificadas. Por fim, foi utilizado um ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) para validar os resultados do imunossensor desenvolvido. A exatidão dos resultados do imunossensor para a quantificação da ovotransferrina foi comprovada, permitindo efetuar o controlo de um principal alergénio alimentar, verificar a conformidade dos rótulos com a legislação, cumprindo assim os objetivos estipulados do tema proposto.