Contribuição para o desenvolvimento de um imunolipossoma com duplo direcionamento ativo para o tratamento de tumores cerebrais

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Rita, Cristina Correia Costa
Data de Publicação: 2020
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10400.5/20208
Resumo: Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária
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spelling Contribuição para o desenvolvimento de um imunolipossoma com duplo direcionamento ativo para o tratamento de tumores cerebraisBBBimunolipossomananomedicinapanobinostattumor cerebralBBBbrain tumorimmunoliposomesnanomedicinpanobinostatDissertação de Mestrado Integrado em Medicina VeterináriaNa área da oncologia salientam-se semelhanças fisiopatológicas entre humanos e animais. A terapêutica nos tumores cerebrais representa um grande desafio, visto que, estes são caracterizados por um crescimento rápido e invasivo e os fármacos anti-neoplásicos apresentam grande dificuldade em atravessar a barreira hematoencefálica (BBB). Assim sendo, é imperativo o desenvolvimento de novos sistemas de fármacos que ultrapassem estas limitações. Após a descoberta da estrutura das células neoplásicas e da BBB, as nanopartículas como lipossomas e as moléculas de direcionamento têm demonstrado um grande potencial na modulação da disponibilidade dos fármacos utilizando mecanismos fisiológicos. Deste modo, o presente estudo teve como objetivo contribuir para o desenvolvimento de um imunolipossoma com duplo direcionamento ativo para o tratamento de tumores cerebrais. Para tal, foi testada a expressão do folato e os efeitos citotóxicos do panobinostat (iHDAC) em linhas de tumores cerebrais primárias (U87) e secundárias (MCF7), tendo sido comparado com a atividade de lipossomas encapsulados com panobinostat e/ou acoplados a folatos. Adicionalmente, foram desenvolvidos e testados, num modelo da BBB in vitro, imunolipossomas em fusão com anticorpos de domínio único (FC5 e G3) com a capacidade de atravessar a BBB. Por fim, foi proposto o modelo in vitro da BBB + U87, testando os imunolipossomas com duplo direcionamento para a BBB e para as células neoplásicas. Foram realizados dois ensaios independentes para cada fármaco e linha celular e em duplicado para cada concentração. A viabilidade celular foi avaliada através do reagente WST-1 e os valores de IC50 calculados através do programa GraphPad Prism 8. Para análise estatística realizou-se uma ANOVA e o teste de Tukey, utilizando o programa R. Os resultados obtidos sugerem que o panobinostat apresenta um efeito citotóxico nas linhas celulares U87 e MCF7. As formulações lipossomais com vectorização ativa apresentam efeito citotóxico semelhante à formulação livre. Além disso, o panobinostat não apresenta efeitos citotóxicos na linha celular da BBB. Com base nos resultados obtidos no ensaio da BBB in vitro, supõe-se que o anticorpo G3 (29,29%) seja mais eficaz na passagem através da BBB comparativamente ao FC5 (11,62%). No ensaio do modelo BBB + U87 ocorreu diminuição da integridade da barreira, porém observou-se efeito citotóxico na linha U87. Serão necessárias otimizações do novo modelo, estudos pré-clínicos e translacionais para determinar a utilidade clínica e a segurança do panobinostat lipossomal.ABSTRACT - CONTRIBUTION TO THE DEVELOPMENT OF AN IMMUNOLIPOSOME WITH DUAL-TARGETING FOR THE TREATMENT OF BRAIN TUMORS - In oncology field, there are physiopathological similarities between humans and animals. Therapy in brain tumors represents a major challenge, since they are characterized by rapid and invasive growth and the antineoplasic drugs have great difficulty in crossing the blood-brain barrier (BBB). Therefore, it is imperative to develop new drug systems that overcome these limitations. After discovering the structure of neoplastic cells and BBB, nanoparticles such as liposomes and targeting molecules have shown great potential in the modulation of drug availability using physiological mechanisms. Thus, the present study aimed to contribute to the development of an immunoliposome with double active targeting for the treatment of brain tumors. For this purpose, folate expression and the cytotoxic effects of panobinostat (iHDAC) in primary (U87) and secondary (MCF7) brain tumor lines were tested, having been compared with the activity of liposomes encapsulated with panobinostat and/or coupled to folates. In addition, immunoliposomes fused with single domain antibodies (FC5 and G3) with the ability to cross the BBB were developed and tested in a BBB model in vitro. Finally, the in vitro model of BBB + U87 was proposed, testing immunoliposomes with double targeting for BBB and neoplastic cells. Two independent assays were performed for each drug and cell line and in duplicate for each concentration. Cell viability was evaluated by WST-1 reagent and IC50 values were calculated using GraphPad Prism 8 software. Statistical analysis was performed using one-way ANOVA and Tukey test using R software. The results obtained suggest that panobinostat has a large cytotoxic effect on U87 and MCF7 cell lines. The active vectorized liposomal formulations have a cytotoxic effect similar to free formulation. In addition, it is suggested that panobinostat has no cytotoxic effects on the cell line of the BBB. Based on the results obtained in the BBB in vitro assay, it is assumed that G3 antibody (29.29%) is more effective in passing through BBB compared to FC5 (11.62%). In the BBB + U87 assay, the integrity of the barrier decreased, but a cytotoxic effect was observed on the U87 line. Optimizations of the new model, pre-clinical and translational studies will be required to determine the clinical utility and safety of liposomal panobinostat.Universidade de Lisboa, Faculdade de Medicina VeterináriaSilva, Frederico Nuno Castanheira Aires daNeves, Solange Judite Roque Coelho Alves GilRepositório da Universidade de LisboaRita, Cristina Correia Costa2020-07-29T16:32:41Z2020-07-162020-07-16T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10400.5/20208TID:202545571porRita CCC 2020. Contribuição para o desenvolvimento de um imunolipossoma com duplo direcionamento ativo para o tratamento de tumores cerebrais [dissertação de mestrado]. 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