Sequenciação de nova geração: o paradigma dos parasitas

• Autor(a) principal: Vilares, Anabela
• Data de Publicação: 2018
• Outros Autores: Borges, Vítor, Sampaio, Daniel, Vieira, Luís, Ferreira, Idalina, Martins, Susana, Reis, Tânia, Gomes, João Paulo, Gargaté, Maria João
• Tipo de documento: Artigo
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10400.18/5696
• topic: Toxoplasma gondii; Toxoplasmose; Parasitas; Infecções Sistémicas e Zoonoses; Doenças Infecciosas; Vigilância Laboratorial; Sequenciação de Nova Geração; Sequenciação do Genoma Completo; Saúde Pública; Portugal

Toxoplasma gondii é um protozoário intracelular obrigatório responsável pela Toxoplasmose, infetando diferentes espécies incluindo o Homem. Na Europa e no Norte da América, T. gondii tem uma população clonal constituída por tipo I, II, III. No entanto, estudos recentes têm descrito uma maior diversidade genética, com a identificação de estirpes recombinantes e atípicas mais virulentas. Em Portugal, o conhecimento dos genótipos circulantes de T. gondii é limitado. Neste sentido, estudou-se a diversidade genética de 68 estirpes, incluindo 51 estirpes de T. gondii isoladas em Portugal, a estirpe de referência RH e 16 outras estirpes de referência. Neste estudo realizou-se a genotipagem clássica (Sag2), PCR multiplex de 5 microssatélites e uma combinação de sequenciações por Sanger e NGS de oito loci responsáveis pela virulência. A genotipagem clássica (tipo I, II, III) foi obtida em 100% das estirpes e mostrou que a maioria das estirpes isoladas em Portugal eram do tipo II (70,6%; 36/51) e as restantes 15 do tipo I. A análise de microssatélites por PCR multiplex aumentou o poder discriminatório em apenas mais um tipo identificado. Contudo, quando se adicionaram as metodologias de sequenciação por Sanger e NGS o poder discriminatório aumentou para 36 tipos diferentes. A combinação destas metodologias (Sanger/NGS) permitiram a identificação de uma estrutura mosaico nos isolados de T. gondii em Portugal, não conseguida anteriormente por qualquer uma das outras tecnologias utilizadas.