Biochemistry of Staphylococcus aureus adhesins: identification of a new vitronectin binding protein on Staphylococcus aureus

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Amaral, Joana Sofia Igreja
Data de Publicação: 2019
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: eng
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10451/43480
Resumo: Trabalho Final de Mestrado Integrado, Ciências Farmacêuticas, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia, 2019
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spelling Biochemistry of Staphylococcus aureus adhesins: identification of a new vitronectin binding protein on Staphylococcus aureusStaphylococcus aureus, NEAT family, IsdB, Stationary phase, Exponential phase, Vitronectin, NaClMestrado Integrado - 2019Ciências da SaúdeTrabalho Final de Mestrado Integrado, Ciências Farmacêuticas, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia, 2019O número de casos de infeções por Staphylococcus aureus tende a crescer a cada ano. Porém, o inverso acontece quando se observa os níveis de eficácia dos antibióticos. Embora tenha havido muito progresso científico acerca dos fatores de virulência responsáveis pela proteção desta bactéria das defesas do ser humano, ainda existem algumas conexões desconhecidas entre Staphylococcus aureus e o hospedeiro. Este estudo teve como objetivo investigar a capacidade de IsdB, uma proteína presente na parede celular de Staphylococcus aureus, de se ligar à vitronectina, uma proteína humana presente no sangue e na matriz extracelular. Como não há muita informação disponível sobre IsdB na literatura, este trabalho teve como um dos seus objetivos tentar perceber quais as condições ideias para a expressão desta proteína, uma proteína que pertence à família NEAT. Para o efeito células de S. aureus foram crescidas em diferentes meios de cultura e em diferentes estadios de crescimento e analisada a produção de IsdB por SDS-PAGE e western blot. A pesquisa mostrou que a expressão de IsdB é mais alta em meios pobres em ferro e muito mais evidente na fase estacionária do crescimento bacteriano do que na fase exponencial. Este resultado foi confirmado por avaliação da transcrição do gene que codifica para IsdB, utilizando a técnica RT-qPCR. Foi demonstrado que a produção de IsdB começa somente após a fase exponencial, sugerindo um papel importante na virulência do Staphylococcus aureus, pelo que deve ser estudado como um potencial alvo para possíveis medicamentos preventivos. Neste trabalho, foi ainda demonstrada, através de técnicas de ELISA, a existência de ligação entre IsdB e a vitronectina. Os dados obtidos revelaram uma constante de dissociação de 9,6nM e um nível de saturação dos recetores IsdB ao serem adicionados 250ng de Vn por poço. As experiências realizadas na presença de diferentes concentrações de NaCl, sugerem que esta ligação é dependente de NaCl, sendo que a ligação IsdB-Vn é inversamente proporcional à quantidade presente do sal. Com base nestes resultados, sugere-se que mais estudos sejam realizados para entender o mecanismo desta relação entre NaCl, IsdB e vitronectina.The number of cases of S. aureus infections tend to grow every year while the effectiveness of antibiotics continues to decline. Although a lot of scientific progress has been made in terms of understanding the virulence factors involved in hiding this bacterium from host defences there are still some unknow connections between Staphylococcus aureus and the human body. This study aims to investigate a new possible bonding between IsdB from Staphylococcus aureus and vitronectin, a human protein present in the blood and extracellular matrix. There isn´t much information available about IsdB in literature so we set out the goal to better understand this member of the NEAT family. The expression of IsdB protein in different mediums and in different stages of growth were analysed by SDS-PAGE followed by western blot techniques. The results have shown that IsdB expression is higher in pour-iron mediums and much more relevant in the stationary phase rather than the exponential one. These results were confirmed by transcription analysis of the IsdB coding gene by RT-qPCR. It was observed that IsdB is only produced after the exponential phase. Based on these results, IsdB seems to have an important role in the pathogenesis of Staphylococcus aureus and should be further studied as a target for potential preventive medicines. In this work, it is demonstrated through ELISA assays, that IsdB binds to vitronectin. The obtained results revealed a dissociation constant of 9.6nM and the saturation level of IsdB that was reached at a concentration of 250ng Vn. Experiments performed in the presence of different concentrations of sodium chloride show that the interaction between is the dependent on this salt, being inversely proportional to the present amount of sodium chloride. Based on the obtained data, it is suggested that more studies should be done to understand the mechanism of this relationship between NaCl, IsdB and vitronectin.Università di PaviaPietrocola, GiampieroPimentel, Madalena Maria VilelaRepositório da Universidade de LisboaAmaral, Joana Sofia Igreja2020-05-04T22:59:30Z2019-12-202019-11-142019-12-20T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10451/43480TID:202476006enginfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2023-11-08T16:43:59Zoai:repositorio.ul.pt:10451/43480Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-19T21:56:16.828716Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
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