Estudo e etiologia de doenças no âmbito da citogenética humana: Abordagem convencional e MLPA

• Autor(a) principal: Ferreira, Rafaela
• Data de Publicação: 2021
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10348/10551
• topic: Cromossomas; Citogenética

O genoma é o que define o indivíduo, a sua espécie e as suas características individuais. Sendo uma entidade dinâmica, está em constante evolução, com o surgimento de novos elementos e o desaparecimento de outros. O DNA está compactado e distribui-se por 23 pares de cromossomas, sendo que cada cromossoma possui genes que garantem a transmissão correta da informação genética ao longo das gerações. O cariótipo é o método mais completo quanto à análise para a caracterização dos cromossomas. As anomalias em termos do número de cópias e as alterações estruturais dos cromossomas podem provocar alterações fenotípicas e mostrar-se patogénicas para os indivíduos que as possuem. A Citogenética Clássica consiste num método de análise direta dos cromossomas, através da observação direta de metafases, que visa identificá-los, classificá-los e avaliar a sua integridade e número. O cariótipo é realizado quando existe suspeita de anomalias cromossómicas e quando existem desordens do foro sexual, múltiplas anomalias congénitas e/ou défice cognitivo, dificuldades de aprendizagem, infertilidade ou abortos de repetição, no caso de se tratar de diagnóstico pós-natal, ou quando existem anomalias ecográficas ou rastreio bioquímico alterado, no caso de se tratar de diagnóstico pré-natal. Entre setembro de 2019 e março de 2020, na Unidade de Citogenética do Centro de Genética Médica Jacinto Magalhães, foram efetuadas culturas sincronizadas de linfócitos, a partir de amostras de sangue periférico, seguidas da manipulação conveniente e da técnica de bandeamento GTL, de forma a poder observar e estudar os cromossomas dos respetivos indivíduos. As células provenientes de amostras fetais foram cultivadas até que pudessem ser devidamente manipuladas, com posterior bandeamento GTL. Em ambos os casos, a análise do cariótipo foi realizada com recurso ao microscópio e ao sistema de captura e tratamento de imagens de metafases, o Citovision, de forma a avaliar o número e estrutura dos cromossomas. Das 59 amostras analisadas, identificaram-se seis anomalias. Destas, apenas duas envolviam alterações estruturais dos cromossomas. As restantes quatro consistiam em anomalias numéricas, sendo que duas envolviam os cromossomas sexuais. Foi observada a execução da técnica Fluorescent in situ hybridization, com recurso sondas específicas para a anomalia que se pretende detetar e de acordo com o protocolo estabelecido pelo fabricante. A técnica de citogenética molecular MLPA foi aplicada a amostras que requeriam tal intervenção, seguindo o protocolo definido pelo fabricante, com o objetivo de detetar alterações do número de cópias causadoras de patologia. Foram utilizados os painéis SALSA®MLPA®ProbemixP245(MRC-Holland™) e SALSA®MLPA®ProbemixP297(MRC-Holland™). Dos 50 indivíduos estudados recorrendo a esta técnica, nove apresentaram anomalia. O painel SALSA®MLPA®ProbemixP250(MRCHolland™) foi utilizado para melhor caracterizar dois dos casos e confirmar a alteração envolvida.