Fosforilação do efetor Tir e a sua interação com proteínas alvo do hospedeiro

• Autor(a) principal: Veloso, Tiago Henrique da Costa
• Data de Publicação: 2020
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10362/118782
• topic: Tir; SHP-1; modificações pós-traducionais; interação proteína-proteína; proteínas intrinsecamente desordenadas; espetroscopia de RMN; Domínio/Área Científica::Engenharia e Tecnologia::Outras Engenharias e Tecnologias

Tir é uma proteína efetora intrinsecamente desordenada (IDP) de Escherichia coli Enteropatogénica (EPEC) e Enterohemorrágica (EHEC) que é translocada para o interior do hospedeiro. Na região C-terminal (C-Tir), este efetor mimetiza quatro motivos, conhecidos como ITIMs, que contêm tirosinas (Y454, Y474, Y483, Y511) que são fosforiladas por cinases do hospedeiro. Os padrões de fosforilação resultantes são reconhecidos por uma série de proteínas do hospedeiro que desencadeiam mudanças na sinalização e nos processos celulares do mesmo. Destas proteínas, destaca-se a fosfatase SHP-1, essencial em vias de sinalização de resposta imunitária. Nesta dissertação propusemos clarificar os aspetos moleculares da interação entre C-Tir e o domínio C-SH2 de SHP-1 e perceber como molecularmente a fosforilação molda essa interação. Através da espetroscopia de RMN, foi realizada a reatribuição das ressonâncias da versão fosforilada de C-Tir e foram analisadas as propensões de estruturas secundárias. Este estudo permitiu a identificação de regiões com tendência para hélices-α, localizadas em zonas conhecidas por interagir com proteínas do hospedeiro. A fosforilação é descrita como um requisito para a interação entre C-Tir e SHP-1. Contudo, os ensaios de interação realizados entre as duas proteínas pré-fosforilação sugerem que a mesma pode ocorrer intrinsecamente, através da região ITIM, que compreende Y511, identificada como uma região com preponderância para estrutura hélice-α. Foi monitorizada a cinética e a extensão da fosforilação das quatro tirosinas, demonstrando que todas são fosforiladas simultaneamente, com Y454 a ser a mais rápida e Y483 a ser a mais lenta. Além disso, foi verificado que C-Tir fosforilada interage com o domínio C-SH2, através das quatro regiões ITIM. A região ITIM que contém Y454, cuja fosforilação é mais rápida, é a que apresenta menos afinidade para C-SH2, comparativamente com as restantes que apresentam afinidades semelhantes entre elas. Este trabalho abre caminho para novos estudos sobre os mecanismos de virulência com implicações na saúde e na doença.