Avaliação do papel dos vários tipos de células do SNC na lesão de isquemia-reperfusão associado ao AVC

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Santos, Sofia Lousada dos
Data de Publicação: 2021
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10451/54431
Resumo: Tese de mestrado, Ciências Biofarmacêuticas, 2021, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia
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spelling Avaliação do papel dos vários tipos de células do SNC na lesão de isquemia-reperfusão associado ao AVCAVCIsquemiaReperfusãoOACMInflamaçãoCélulas gliaisTeses de mestrado -2021Ciências da SaúdeTese de mestrado, Ciências Biofarmacêuticas, 2021, Universidade de Lisboa, Faculdade de FarmáciaA isquemia cerebral caracteriza-se pela obstrução de um vaso sanguíneo que irriga o cérebro, resultando num processo inflamatório que conduz a neurodegeneração. Após o evento isquémico as células gliais são gradualmente ativadas, desempenhando um papel importante primeiro na contenção do dano, mas posteriormente no agravamento da patologia, através da libertação de mediadores pró-inflamatórios e anti-inflamatórios. O acidente vascular cerebral (AVC) é uma doença com a capacidade de provocar danos neurológicos irreversíveis e, como tal, torna-se necessário investigar terapêuticas adequadas para a redução das complicações neurológicas, uma vez que a única terapêutica farmacológica direcionada para abordagem de doentes com AVC isquémico (administração de trombolíticos) apresenta muitas limitações. Este trabalho surge com o objetivo de estudar as alterações e comportamentos que ocorrem nas células do sistema nervoso central (SNC) durante as diferentes fases de isquemia-reperfusão, contribuindo para uma melhor compreensão fisiopatológica desta condição, assim como também descobrir potenciais novos alvos terapêuticos. O modelo de oclusão da artéria cerebral média foi desenvolvido em 8 ratos, divididos aleatoriamente por dois grupos: o grupo de isquemia de 1 hora (I 1h) e o grupo de isquemia-reperfusão de 1 hora (I/R 1h). Posteriormente, os cérebros dos animais foram utilizados para determinar a expressão de marcadores de microglia (Iba1, iNOS, Arg) e astrócitos (GFAP, S100B); mediadores inflamatórios (TNF-α, IL-1β, IL-10); proteínas de sinalização específicas (Akt, GSK-3β); e proteínas sinápticas (PSD-95, Syn) utilizando os métodos de Western Blot e qRealTime-PCR. Os nossos resultados sugerem que o TNF-α é mais expresso no grupo I/R 1h (~ 3,5 fold), enquanto os ratos dos dois grupos mostram níveis diminuídos de IL-10 no hemisfério afetado (~ 0,2 fold – I 1h; ~ 0,4 fold - I/R 1h), significando que a inflamação está presente e pode desempenhar um papel relevante na lesão cerebral. Além disso, houve uma diminuição semelhante na expressão génica de PSD-95 e Syn em ambos os grupos (~ 0,5 fold), sugerindo uma rápida lesão sináptica após o período de isquemia. Houve também uma tendência de perda de células da micróglia no hemisfério lesado, conforme observado pela expressão reduzida de Iba1 no grupo I/R 1h (~ 0,4 fold), enquanto para os astrócitos houve um aumento da expressão de GFAP no hemisfério contralateral, no grupo I/R (~ 1,6 fold), sugerindo o recrutamento destas células para auxiliar a região afetada pelo tempo de isquemia. Apesar destes resultados, é necessário investigar o que acontece aos parâmetros estudados noutras janelas de tempo, tentando encontrar novas abordagens terapêuticas direcionadas ao processo inflamatório para redução da lesão cerebral causada pela isquemia-reperfusão.Cerebral ischemia is characterized by the obstruction of a blood vessel that irrigates the brain, resulting in an inflammatory process that leads to neurodegeneration. After the ischemic insult, the glial cells are gradually activated, playing an important role both in damage resolution as well as in aggravating the pathology, through the release of pro-inflammatory and anti-inflammatory mediators. Stroke can cause irreversible neurological damage, so it becomes necessary to investigate appropriate therapies, since the only the only one indicated pharmacological therapy for ischemic stroke patients (administration of thrombolytics) has many limitations. This work aims to study the changes that occur in the cells of the central nervous system (CNS) during the different phases of ischemia-reperfusion, contributing to a better pathophysiological understanding of this condition, as well as to discover potential new therapeutic targets. Thus, the middle cerebral artery occlusion model was developed in 8 rats, randomly divided into two groups: the group of animals subjected to 1h of ischemia (I 1h) and the group of animals subjected to 1h of ischemia followed by 1h of reperfusion (I/R 1h). Subsequently, the animals' brains were isolated and cut into sections to determine the expression of reactive markers of microglia (Iba1, iNOS, Arg) and astrocytes (GFAP, S100B); inflammatory mediators (TNF-α, IL-1β, IL-10); specific signaling proteins (Akt, GSK-3β); and synaptic partners (PSD-95, Syn) using Western Blot and qRealTime-PCR methods. Our results suggest that TNF-α is more expressed in the I/R 1h group (~ 3,5 fold), while the rats in both groups show decreased levels of IL-10 in the affected hemisphere (~ 0,2 fold - I 1h; ~ 0,4 fold - I/R 1h), meaning that inflammation is present and may play a role in brain damage, differently depending on the damage phase. In addition, there was a similar decrease in PSD-95 and Syn gene expression in both groups (~ 0,5 fold), suggesting a rapid synaptic lesion after the ischemia. There was also a tendency to lose microglia cells in the injured hemisphere, as observed by the reduced expression of Iba1 in the I/R 1h group (~ 0,4 fold), while for astrocytes there was an increase in GFAP expression in the contralateral hemisphere in the I/R group (~ 1,6 fold), suggesting the recruitment of these cells to assist the region affected by the ischemia time. Despite these auspicious results for future studies, it is necessary to investigate what happens to the parameters studied in other time windows, trying to find new therapeutic approaches aimed at the inflammatory process to reduce brain damage caused by ischemia-reperfusion.Com o patrocínio do i.Med, Faculdade de Farmácia da Universidade de Lisboa.Rocha, João Pedro FidalgoBorralho, Adelaide Maria Afonso FernandesRepositório da Universidade de LisboaSantos, Sofia Lousada dos2021-03-262021-02-262024-03-26T00:00:00Z2021-03-26T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10451/54431TID:203012690porinfo:eu-repo/semantics/embargoedAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2023-11-08T17:00:48Zoai:repositorio.ul.pt:10451/54431Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-19T22:05:15.591165Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
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