Structural studies of human p22HBP protein

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Delgado, Leonildo Pedro Cabral
Data de Publicação: 2011
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: eng
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/7682
Resumo: The present work aimed to perform the first structural studies on human p22HBP protein by NMR and at same time to study the interaction of some tetrapyrrole with this protein by fluorescence quenching. To accomplish these objectives we had to start by optimizing the conditions for producing and purifying human p22HBP. Parameters such as the moment of induction, the inducer concentration and time for cell lysis were evaluated. After the optimization, cultures of p22HBP in M9 minimal media enriched with 15NH4Cl and 13C-glucose were grown. The first spectra of human p22HBP and the backbone resonance assignment, first and most important step in any protein structural elucidation by NMR, were performed. Finally, interaction studies were performed using chemical shift mapping and fluorescence quenching methods, and they indicated that the tetrapyrrole binding site is formed by the same residues described in previous studies; and the dissociation constant by which human p22 HBP binds PPIX and hemin was determined as being in the nanomolar range, being this interaction of high affinity.
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