Produção e purificação de biofármacos antileucémicos

• Autor(a) principal: Ferreira, Tatiana Domingues
• Data de Publicação: 2022
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/37876
• topic: L-asparaginase; Biofármaco; Bacillus subtillis; Produção; Purificação; Líquidos iónicos suportados em sílica

A L-asparaginase (LA) é uma enzima responsável por hidrolisar o aminoácido L-asparagina em ácido L-aspártico e amoníaco, e com aplicações na indústria farmacêutica como um biofármaco antileucémico, nomeadamente no tratamento da leucemia linfoblástica aguda, no tratamento do cancro da mama, ovários e cerebral. A LA pode ser produzida por bactérias, fungos ou leveduras por bioprocessos fermentativos. Atualmente, a LA comercializada para fins terapêuticos provém maioritariamente de Escherichia coli e Erwinia chrysanthemi. No entanto, a LA produzida por estes microrganismos apresenta também uma atividade de glutaminase intrínseca que pode provocar uma ativação do sistema imunológico, causando reações de hipersensibilidade, pancreatite, náuseas e anormalidades da coagulação. Desse modo, a busca por novos microrganismos que produzam a LA com efeitos colaterais reduzidos é de extrema importância. Nesta tese, produziu-se a LA por Bacillus subtillis recombinante, e otimizou-se o processo fermentativo, nomeadamente o momento de indução da produção da LA, a respetiva concentração do indutor (xilose) e a velocidade de agitação. Posteriormente, desenvolveu-se uma nova técnica de purificação para a LA, esta mais económica que os métodos convencionais existentes, através da utilização de líquidos iónicos suportados em sílica (LISS). Nesta etapa, a concentração de proteína total do extrato celular, a massa de LISS utilizada e o tempo de contato entre o extrato celular e o material foram otimizados. Com base nos resultados obtidos, as condições experimentais ótimas para a produção da LA são: densidade ótica de indução de 1,0 com 0,75 % (m/v) de xilose, e uma velocidade de agitação de 200 rpm após a indução. Quanto à purificação da LA utilizando LISS, os melhores resultados foram obtidos usando o extrato celular com uma concentração de proteína total de 18,5 mg/mL, 20 mg de LISS e 60 min de tempo de contato entre o material e o extrato celular.