Avaliação do efeito do fármaco parecoxib na linha celular MG-63

• Autor(a) principal: Lemos, Sílvia Alexandra Queirós
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10348/9313
• topic: in vitro; AINES; osteossarcoma

Inúmeras neoplasias, entre elas o osteossarcoma, apresentam uma sobre expressão da cicloxigenase-2 (COX-2) e, consequentemente de prostaglandinas, associadas a um pior prognóstico. Como tal, fármacos que inibam a COX-2 podem representar uma opção na terapia do cancro. Este estudo teve como principal objetivo avaliar o efeito in vitro do parecoxib (fármaco anti-inflamatório não esteroide, inibidor seletivo da COX-2) na linha celular de osteossarcoma humano MG-63. Para alcançar o objetivo proposto, realizou-se a validação da linha celular por técnicas de citogenética clássica. Por hibridação fluorescente in situ (FISH) foi estudado a amplificação do gene HER2 e a translocação do gene ALK. Posteriormente, as células foram expostas a diferentes concentrações de parecoxib (0, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 800, 1200 e 1600 µM), durante um intervalo de 48 h. A viabilidade celular foi avaliada através do ensaio do brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio (MTT) e permitiu a obtenção do valor do IC50 (inhibitory maximal concentration for half of the population) (163 μM). Este valor, bem como a concentração mais elevada testada (1600 μM), foram utilizados nos ensaios subsequentes. A proliferação celular, a integridade membranar, a avaliação do ciclo celular, a apoptose, a autofagia, os danos no DNA e as alterações morfológicas celulares foram também avaliadas, por imunocitoquímica (Ki-67), deteção da LDH, citometria de fluxo (iodeto de propídio), terminal deoxynucleotidyltransferase-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL), coloração com o laranja de acridina, ensaio do cometa alcalino e coloração de Leishman, respetivamente. Foram identificadas várias alterações cromossómicas na linha celular MG-63, as quais se encontram de acordo com o descrito na literatura. Através da técnica de FISH, não se observaram alterações nos genes ALK/HER2. Comparativamente ao grupo de células não tratadas, pelo ensaio do MTT e da imunocitoquímica, verificou-se respetivamente, que o parecoxib originou uma diminuição quer da viabilidade, quer da proliferação celular, de forma dependente da concentração. A deteção da lactato desidrogenase (LDH) permitiu observar um aumento da libertação desta enzima, semelhante para ambas as concentrações testadas. Por citometria de fluxo, verificou-se uma diminuição das células que se encontram em G0/G1 e uma paragem do ciclo celular nas fases S e G2/M, bem como um aumento da fração sub-G0/G1. O TUNEL revelou um aumento da apoptose nas células tratadas. A coloração com o laranja de acridina permitiu observar um aumento da presença de vacúolos autofágicos, após exposição ao parecoxib. Através do ensaio do cometa alcalino foi possível observar um aumento dos danos no DNA, dependente da concentração. Pela coloração de Leishman, constatou-se uma maior incidência de corpos apoptóticos e citoplasma vacuolizado, proporcional à concentração testada. O parecoxib demonstrou ter efeito nas células de osteossarcoma humano MG-63, levando à diminuição da viabilidade/proliferação celular, à perda da integridade membranar, à paragem do ciclo celular e ao aumento da apoptose/autofagia. Estes resultados sugerem que o parecoxib pode representar um bom candidato para estudos in vivo.