Estudo do efeito do Palbociclib e do Tipifarnib em linhas celulares de carcinomas anaplásicos da tiróide

• Autor(a) principal: VENTURA, Sara Patrícia Lopes
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10362/20063
• topic: Biologia molecular; Tumores; Cancro da tiróid; Neoplasia; Alvos moleculares; Palbococlib; Tipifarnib; Linhas celulares; Domínio/Área Científica::Ciências Médicas

O cancro da tiróide é a neoplasia mais comum do sistema endócrino. Os carcinomas da tiróide que derivam das células foliculares englobam os carcinomas bem-diferenciados (WDTC), os carcinomas pouco diferenciados (PDTC) e os carcinomas indiferenciados ou anaplásicos (ATC). Os WDTC subdividem-se em carcinomas papilares (PTC) e foliculares (FTC). Os ATC representam 2-3 % dos carcinomas da tiróide, sendo considerados os tumores mais agressivos da tiróide, para os quais não existem actualmente terapêuticas eficazes. O nosso grupo identificou, em estudos anteriores, os genes TP53, RAS, CDKN2A (p14ARF/p16INK4A) e CDKN2B e (p15INK4B) e vias relacionadas, como desempenhando papéis essenciais no desenvolvimento de ATC. As proteínas p15INK4B e p16 INK4A funcionam como supressores tumorais inibindo as CDK4/6 e levando à paragem do ciclo celular. O Palbociclib inibe as CDK4/6, sendo esperado que a sua acção compense a perda funcional dos genes CDKN2A e CDKN2B. Por outro lado, mutações no gene HRAS conduzem à activação constitutiva da via MAPK-ERK e, consequentemente, ao desenvolvimento tumoral. A isoforma HRAS tem de ser farnesilada para adquirir actividade oncogénica, representando um alvo molecular do composto Tipifarnib, um inibidor da farnesil transferase (FTI). O objectivo principal deste projecto foi identificar novas terapêuticas direccionadas para alvos moleculares específicos envolvidos no desenvolvimento de ATC, tendo sido estudados dois novos compostos, o Palbociclib e o Tipifarnib. Para estudo do seu efeito nas diferentes linhas celulares foram realizados ensaios de viabilidade metabólica celular (pelo método MTS), ensaios de ciclo e morte celular (por citometria de fluxo) e viabilidade celular (pelo método de exclusão com azul de tripano). Foram usadas três linhas celulares de ATC: C643 (mutações nos genes TP53, HRAS e delecção dos genes CDKN2A e CDKN2B), T238 (mutações nos genes TP53, CDKN2A, BRAF e PIK3CA) e T235 (mutação no gene BRAF); uma linha celular de PTC designada BCPAP (mutações nos genes BRAF e TP53); e células normais de tiróide PCCL3. Nos ensaios de ciclo celular e de viabilidade celular realizados com o Palbociclib observou-se, respectivamente, um aumento significativo de células na fase G0/G1 do ciclo celular e uma diminuição do número de células viáveis ao longo do tempo, nas linhas celulares de ATC e PTC, mas não nas células normais de tiróide. Nos ensaios realizados com o Tipifarnib observou-se um efeito do composto apenas na linha celular de ATC, com mutação no gene HRAS, que consistiu no aumento significativo de células na fase G2/M e na diminuição do número de células viáveis ao longo do tempo. Os resultados preliminares do Tipifarnib quanto à expressão do mRNA de genes envolvidos na regulação do ciclo celular sugeriram, em concordância com os resultados dos ensaios de ciclo celular, que este composto levou à paragem do ciclo na transição G2/M, pelo aumento observado na expressão dos genes CCNA2, CDK2 e CDC2. Os resultados deste estudo sugerem que o Palbociclib e o Tipifarnib poderão ter um papel importante na inibição da progressão tumoral. A continuação deste trabalho poderá contribuir para clarificar quais os mecanismos de acção e a relevância destes compostos como terapêuticas para os ATC.