Efeito da carga do fotossensibilizador em lípidos de Escherichia coli

• Autor(a) principal: Lopes, Diana Carla Salzedas
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/12633
• topic: Microbiologia; Terapia fotodinâmica; Lípidos; Escherichia coli

A inativação fotodinâmica (PDI) é um método simples e eficaz para destruir microrganismos. Esta tecnologia baseia-se na administração de um fotossensibilizador (FS), normalmente uma porfirina ou derivados de ftalocianina, que é preferencialmente acumulado nas células microbianas. A posterior irradiação com luz visível, na presença de oxigénio, conduz à formação de espécies citotóxicas, particularmente espécies reativas de oxigénio (ROS), tais como radicais livres e oxigénio singuleto, que causam danos celulares específicos e levam à inativação do microrganismo. Os principais alvos de PDI são as estruturas microbianas externas, como as paredes e membranas celulares. O conhecimento de como estes alvos moleculares são afetados assume uma grande importância para melhor compreender o processo de fotoinativação. O objetivo deste trabalho foi estudar o efeito causado por cinco derivados porfirínicos com diferente distribuição de carga durante o processo de fotoinativação em lípidos membranares de Escherichia coli. O efeito foi avaliado por quantificação de hidroperóxidos lipídicos e por análise da variação do perfil de ácidos gordos. Culturas de E. coli foram irradiadas com luz branca na presença de cada um dos fotossensibilizadores (5.0 μM) durante 90 e 270 minutos. Após o ensaio de fotoinativação os lípidos membranares foram extraídos e quantificados através do ensaio de fósforo. Os hidroperóxidos presentes nos extratos lipídicos totais foram quantificados através de FOX2 (ferrous oxidation-xylenol orange) e o perfil de ácidos gordos foi adquirido por cromatografia gasosa com detetor de ionização em chama (GC-FID). Após PDI, foi observado a formação de hidroperóxidos com qualquer um dos fotossensibilizadores. A análise do perfil de ácidos gordos mostrou uma diminuição dos ácidos gordos insaturados que dependeu diretamente da distribuição de carga na porfirina. O fotossensibilizador que induziu a maior diminuição de ácidos gordos insaturados foi o que apresentou uma maior taxa de inativação. Uma vez provado que os lípidos da membrana bacteriana são afetados durante PDI, foi também avaliado o efeito dos mesmos fotossensiblizadores em sistemas modelo utilizando lipossomas de 1-palmitoil-2-oleoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina. A oxidação lipídica foi avaliada por espectrometria de massa com ionização por electrospray (ESI-MS). Foram adquiridos espectros de MS para todos os sensibilizadores em diversos tempos e concentrações para avaliar o efeito destas duas variáveis no processo de fotoinativação. Concluiu-se que os fosfolípidos das membranas bacterianas são importantes alvos moleculares de fotoinativação sendo a formação de hidroperóxidos um bom indicador deste processo.