Desenvolvimento de suportes cromatográficos derivados de compostos heterocíclicos para purificação do G-quadruplex

• Autor(a) principal: Rodrigues, Sérgio Miguel Roso
• Data de Publicação: 2015
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10400.6/6069
• topic: Derivados de Acridina; Derivados de Indol; G-Quadruplex; Rmn Hr-Mas; Suportes Cromatográficos; Domínio/Área Científica::Engenharia e Tecnologia:: Outras Engenharias e Tecnologias

As sequências de oligonucleótidos ricas em guanina têm capacidade de formar estruturas de G-quadruplex. Estas estruturas são diversas, transientes, polimórficas e podem ser encontradas em importantes regiões do genoma, tais com os telómeros e oncogenes. Estudos recentes demonstraram que existem ligandos que se ligam seletivamente e estabilizam estas estruturas, sendo estes considerados potenciais agentes anticancerígenos. Tendo em conta estes pressupostos, sintetizaram-se ligandos heterocíclicos derivados de indol para desenvolvimento de suportes cromatográficos através da sua imobilização na Sepharose para purificação de estruturas de G-quadruplex ou plasmídeos que contenham sequências formadoras de estruturas de G-quadruplex. Primeiramente sintetizaram-se os ligandos derivados de acridina e indol acoplados a diferentes poliaminas. Os ligandos derivados de acridina envolveram quatro tipos de reações, bromometilação da acridina, tosilação das aminas, substituição nucleofílica das aminas parcialmente tosiladas e por fim a destosilação dos ligandos. Os ligandos derivados de indol envolveram a condensação do aldeído de indol com as diferentes poliaminas, dos quais resultaram os ligandos IT3 (31%), IT4 (24%) e o IP5 (24%). Os ligandos sintetizados foram analisados e caracterizados por espectroscopia de RMN. A síntese dos suportes cromatográficos foi efetuada imobilizando os ligandos IT3, IT4 e IP5. Estes ligandos foram imobilizados na Sepharose, que havia sido previamente ativada via epóxido. Posteriormente os suportes cromatográficos foram analisados e caracterizados por RMN de HR-MAS, onde se constatou a efetiva imobilização dos derivados de indol na Sepharose, com diferentes densidades de imobilização. A fração de imobilização dos ligandos IT3, IT4 e IP5 foi de 0,15, 0,55 e 0,75, respetivamente. Estes resultados demonstraram que a imobilização de derivados de indol com aminas de cadeia mais longa apresentaram maior percentagem de imobilização.