Avaliação da expressão dos genes de caspase 8 e caspase 9 em Peixe-Zebra (Danio Rerio) expostos a cobre

• Autor(a) principal: Luzio, Ana Catarina Gonçalves
• Data de Publicação: 2008
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10348/2153
• topic: Comunidade aquática; Ecossistema; Metais pesados; Contaminação; Peixe Zebra; Marcadores genéticos

O cobre é um micronutriente essencial que está presente em condições naturais em águas não poluídas. Nas últimas décadas, os ecossistemas aquáticos têm sido contaminados por diversos poluentes resultantes da actividade mineira, da agricultura, da indústria, bem como dos efluentes domésticos. Em consequência, existe um grande interesse na determinação de biomarcadores de exposição ao cobre em peixes de água doce, com vista quer à monitorização dos ecossistemas aquáticos, quer como instrumento de análise da sua toxicidade. Com o objectivo de avaliar o impacto dos poluentes na qualidade ambiental tem sido considerado pertinente desenvolver estudos acerca dos seus efeitos negativos nos ecossistemas. Neste contexto, o uso de marcadores biológicos ou biomarcadores tem assumido particular importância aos níveis molecular e celular como um instrumento sensível de detecção rápida dos efeitos biológicos de avaliação da qualidade dos ecossistemas. O cobre pela sua presença em altas concentrações, induz várias respostas celulares que podem levar a indução de morte celular por apoptose. No presente trabalho, a caspase-8 e a caspase-9 foram usadas como biomarcadores para a detecção do fenómeno apoptótico. A apoptose dependente da via das caspases pode seguir duas vias: a via extrínseca ou dos receptores de morte e a via intrínseca ou mitocondrial. Pelo que, cada uma das caspases seleccionadas pertence a uma das vias: a caspase-8 à extrínseca e a caspase-9 à intrínseca, podendo assim verificar-se se ocorreu activação de apenas uma ou das duas vias. No presente trabalho objectivou-se desenhar primers específicos que permitam a amplificação dos genes em estudo, neste caso em Danio rerio, para posteriormente se analisarem possíveis alterações na expressão destes genes e quantificá-las, de forma relativa, através de RT-PCR quantitativo. Neste trabalho, os peixes-zebra (D. rerio) foram expostos durante 24 e 48 horas a duas concentrações de cobre (12,5 e 100 μg Cu L-1) e para avaliação do seu efeito nas vias extrínseca e intrínseca da apoptose, na brânquia, foram analisadas a expressão dos genes das caspases 8 e 9. Os resultados obtidos mostraram que ocorreu apenas expressão da caspase-9 na brânquia. O facto de não ter ocorrido expressão da caspase-8 sugere que apenas ocorreu indução da apoptose por via intrínseca ou então pode ter ocorrido activação da via extrínseca mas não se ter verificado especificidade para os primers desenhados. Relativamente a expressão da caspase-9, não se verificou um aumento ao longo do tempo de exposição mas sim uma diminuição, podendo este resultado ser justificado por um aumento do stresse oxidativo nas células da brânquia.