Nova Metodologia para o Diagnóstico e Monitorização do Adenocarcinoma Ductal Pancreático

• Autor(a) principal: Costa, Beatriz Varatojo
• Data de Publicação: 2022
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10362/139564
• topic: PDAC; KRAS; biópsia líquida; ctDNA; ARMS; HRMA; Domínio/Área Científica::Engenharia e Tecnologia::Outras Engenharias e Tecnologias

O cancro pancreático destaca-se como o cancro com a menor taxa de sobrevivência na Europa, sendo que o adenocarcinoma ductal pancreático (PDAC) constitui 95% dos casos. O prognóstico de PDAC depende fortemente de plano de rastreio pois os sintomas são negligenciáveis nos estadios ini-ciais da doença, o que leva a que aquando do diagnóstico 80% dos tumores sejam localmente avançados ou metastáticos. A recorrência do cancro em 80% dos doentes após ressecção cirúrgica contribui igual-mente para a reduzida taxa de sobrevivência. Para melhorar o prognóstico do PDAC é fundamental identificar biomarcadores para diagnóstico e monitorização da doença, concomitantemente ao desenvolvimento de metodologias para a sua carac-terização. A utilização de biópsias líquidas, particularmente a análise de DNA tumoral circulante (ctDNA), destaca-se como uma abordagem pouco invasiva de análise de biomarcadores libertados pela massa tumoral e suas metástases. De referir que mutações no gene KRAS são detetadas em mais de 90% dos doentes, tornando-se num potencial biomarcador de PDAC. A análise mutacional de KRAS em amostras de tecido tumoral e ctDNA demonstrou potencial no âmbito do diagnóstico diferencial de PDAC, permitindo a identificação de doentes com maior risco de recorrência. Neste projeto, foi desenvolvida e otimizada uma metodologia de Amplification Refractory Mu-tation System (ARMS) acoplada a High Resolution Melting Analysis (HRMA) para deteção das duas mutações de KRAS mais frequentes em PDAC. Após otimização em material genómico controlo, a estratégia foi validada com amostras tumorais e de plasma de doentes com PDAC, e os resultados com-parados aos obtidos por Sequenciação de Sanger (SS), o método de referência para análise mutacional. A estratégia ARMS/HRMA desenvolvida destaca-se por menor tempo de resposta comparativa-mente a SS, tendo revelado sensibilidade e especificidade para a deteção de ambas as mutações em amostras tumorais. A deteção de mutações em ctDNA extraído de plasma não demonstrou a mesma sensibilidade.