Lipid profile of Leishmania infantum infected macrophages

• Autor(a) principal: Augusto, Vanessa Rita Fonseca
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: eng
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/11599
• topic: Bioquímica clínica; Macrófagos; Doenças infecciosas; Leishmaniose

A leishmaniose visceral (LV) é uma doença infeciosa causada por algumas espécies do género Leishmania (L. infantum e L. donovani) que se revela particularmente problemática nas regiões tropicais e subtropicais. Uma vez no hospedeiro, os parasitas apresentam um grande tropismo para os macrófagos subvertendo as funções imunomoduladoras destas células. O estudo destes mecanismos de subversão foi durante largos anos focado na modulação a nível proteico, sendo dada pouca relevância ao efeito dos parasitas no perfil lipídico dos macrófagos. No entanto, devido ao crescente conhecimento acerca das funções imunomoduladoras dos lípidos, estes podem ser vistos como alvos terapêuticos promissores para o tratamento da leishmaniose. Deste modo, o objetivo geral deste trabalho consistiu na análise do perfil lipídico de macrófagos infectados com Leismania infantum, usando uma abordagem lipidómica, de modo a elucidar a contribuição de mudanças induzidas na patogénese da infeção. As diferentes classes de fosfolípidos foram separadas por TLC e quantificadas por através de um ensaio de fósforo e os ácidos gordos analisados por GC-FID. O extrato lipídico total foi analisado por espetrometria de massa de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC-MS e MS / MS), permitindo a identificação da estrutura detalhada dos fosfolípidos, nomeadamente da cabeça polar e composição dos ácidos gordos. O perfil fosfolipídico dos macrófagos revelou ser notoriamente alterado após a infeção tendo-se observado uma diminuição significativa no teor de PC e um correspondente aumento no conteúdo de LPC apenas em células infectadas com promastigotas viáveis. Verificou-se ainda que a infeção com parasitas viáveis causou uma diminuição no teor relativo de ácido palmítico e um aumento na razão de ácidos gordos C18/C16. Os resultados de HPLC-MS reforçaram estas observações, tendo evidenciado alterações consideráveis nos perfis de PC, LPC, PI e PS entre macrófagos, macrófagos expostos a promastigotas mortos ou viáveis. Avaliada a transcrição de genes relacionados com o metabolismo lipídico verificou-se um aumento nos níveis de ARNm dos genes Pla2gaf, Fabp4 e Elovl2, podendo justificar deste modo os aumentos previamente observados nos níveis de LPC e ácidos gordos C18. Por fim observou-se que os promastigotas possuem considerável atividade enzimática PLA2 e que esta atividade poderá estar relacionada com a entrada do parasita na célula facilitando a infeção.