Caracterização molecular da otubaína, uma deubiquitinase de Leishmania chagasi

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Azevedo, Clênia dos Santos
Data de Publicação: 2014
Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Monografias da UnB
Texto Completo: http://bdm.unb.br/handle/10483/8621
Resumo: Monografia (graduação)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ceilândia, Curso de Farmácia, 2014.
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spelling Azevedo, Clênia dos SantosCharneau, Izabela Marques Dourado BastosMotta, Flávia da Silva NaderAZEVEDO, Clênia dos Santos. Caracterização molecular da otubaína, uma deubiquitinase de Leishmania chagasi. 2014. 48 f., il. Monografia (Bacharelado em Farmácia)—Universidade de Brasília, Brasília, 2014.http://bdm.unb.br/handle/10483/8621Monografia (graduação)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ceilândia, Curso de Farmácia, 2014.O gênero Leishmania representa um grupo de protozoários intracelulares que são agentes etiológicos de doenças infecciosas chamadas leishmanioses. Esse espectro de doenças possui tratamento ineficiente com sérios efeitos adversos. Nosso grupo de estudo busca a identificação de potenciais alvos de drogas para a quimioterapia de doenças neglicenciadas, entre elas a leishmaniose, focando principalmente nas proteases. A sinalização de proteínas para degradação via proteassoma 26S ocorre quando cadeias de ubiquitina (Ub) são conjugadas por Ub-ligases. Ub-hidrolases (enzimas de deubiquitinação - DUBs) atuam na remoção da Ub. Estas enzimas possuem importante participação na modulação da resposta imune, como a otubaína, a primeira DUB relacionada à regulação da anergia de linfócitos T. Este trabalho apresenta a caracterização enzimática da enzima recombinante otubaína de Leishmania chagasi (rOTULc) e sua localização no parasito. A recombinante WT e os mutantes F82S/F182S/L265P, F82S/L265P e L265P foram testados com tetra ubiquitina ligada por K48 ou K63. A rOTULc demonstrou clivar tetra ubiquitina ligada por K48 e parcialmente ligada por K63. O mutante L265P demonstrou atividade reduzida na tetra ubiquitina ligada por K48. Os mutantes F82S/F182S/L265P e F82S/L265P não clivaram ambos substratos. A imunofluorescência da OTULc demonstrou um padrão vesicular, ao longo do parasito. Ademais, otubaína não colocalizou com a catepsina-B, uma protease lisossomal, na forma promastigota. Os achados mostram que a rOTULc cliva preferencialmente tetra ubiquitina ligada por K48, uma ligação associada a degradação proteica pelo proteassoma 26S, sugerindo um envolvimento na preservação de proteínas evitando sua degradação.Submitted by Mariana Silva Cavadas (mari_cavadas@hotmail.com) on 2014-10-09T14:08:21Z No. of bitstreams: 1 2014_CleniadosSantosAzevedo.pdf: 1473577 bytes, checksum: f37d3508516052c39f56b4fd0bef6394 (MD5)Approved for entry into archive by Patricia Nunes(patricia@bce.unb.br) on 2014-10-10T12:26:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_CleniadosSantosAzevedo.pdf: 1473577 bytes, checksum: f37d3508516052c39f56b4fd0bef6394 (MD5)Made available in DSpace on 2014-10-10T12:26:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_CleniadosSantosAzevedo.pdf: 1473577 bytes, checksum: f37d3508516052c39f56b4fd0bef6394 (MD5)The genus Leishmania represents a group of intracellular protozoan that are the etiological agents of the infectious diseases called leishmaniasis. This spectrum of diseases has ineffective treatment with serious adverse effects. Our research group aims to identify potential drug targets for chemotherapy of neglected diseases, as leishmaniasis, focusing especially on proteases. The signaling of proteins for degradation by the 26S proteasome occurs when ubiquitin (Ub) chains are conjugated by Ub-ligases. Ub-hydrolases (deubiquitylating enzymes - DUBs) perform the removal of Ub. These enzymes have important mechanisms in the modulation of immune response, like otubain, the first DUB related to the regulation of the anergy in T cells. This work presents the enzymatic characterization of the recombinant otubain from Leishmania chagasi (rOTULc) and its localization within the parasite. The recombinant WT and the F82S/F182S/L265P, F82S/L265P and L265P mutants were assayed on K48- or K63-linked tetra ubiquitin. The rOTULc is shown to cleave K48-linked Ub and partially K63-linked. The L265P mutant showed only reduced activity on K48-linked Ub. The F82S/F182S/L265P and F82S/L265P mutants did not cleave either substrates. The immunofluorescence of OTULc showed a vesicular pattern, along the parasite. Besides, otubain did not colocalized with cathepsin-B, a lysosomal protease, in promastigote form. The findings show that rOTULc cleaves preferentially tetra K48-linked Ub, a linkage associated to protein degradation by 26S proteasome suggesting an involvement in proteins rescuing by avoiding their degradation.LeishmanioseDoenças infecciosasProtozoárioCaracterização molecular da otubaína, uma deubiquitinase de Leishmania chagasiinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/bachelorThesis2014-10-10T12:26:12Z2014-10-10T12:26:12Z2014-10-10T12:26:12Z2014-06-24info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Biblioteca Digital de Monografias da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNBORIGINAL2014_CleniadosSantosAzevedo.pdf2014_CleniadosSantosAzevedo.pdfapplication/pdf1473577http://bdm.unb.br/xmlui/bitstream/10483/8621/1/2014_CleniadosSantosAzevedo.pdff37d3508516052c39f56b4fd0bef6394MD51CC-LICENSElicense_urllicense_urltext/plain49http://bdm.unb.br/xmlui/bitstream/10483/8621/2/license_url4afdbb8c545fd630ea7db775da747b2fMD52license_textlicense_textapplication/octet-stream0http://bdm.unb.br/xmlui/bitstream/10483/8621/3/license_textd41d8cd98f00b204e9800998ecf8427eMD53license_rdflicense_rdfapplication/octet-stream23148http://bdm.unb.br/xmlui/bitstream/10483/8621/4/license_rdf9da0b6dfac957114c6a7714714b86306MD54LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain1858http://bdm.unb.br/xmlui/bitstream/10483/8621/5/license.txt5f4a3625a06d37279108d294ed561b75MD5510483/86212018-11-27 07:59:25.792oai:bdm.unb.br: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Biblioteca Digital de Monografiahttps://bdm.unb.br/PUBhttp://bdm.unb.br/oai/requestbdm@bce.unb.br||patricia@bce.unb.bropendoar:115712018-11-27T09:59:25Biblioteca Digital de Monografias da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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