A RT – qPCR como ferramenta de diagnóstico da infecção por Pneumocystis jirovecii

• Autor(a) principal: CARVALHO, Maria da Conceição Baleia
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10362/19374
• topic: Biologia molecular; Diagnóstico; Infeção; Doenças tropicais; Pneumocystis jirovecii; Domínio/Área Científica::Ciências Médicas

Pneumocystis jirovecii é um importante agente oportunista responsável por uma das mais severas infecções respiratórias em doentes imunocomprometidos, designada por pneumonia por Pneumocystis (PPc). Embora a PPc esteja associada à infecção pelo vírus da imunodeficiência humana (VIH), o número de casos de PPc e portadores assintomáticos de P. jirovecii tem vindo a aumentar entre os doentes seronegativos para VIH com outras imunodeficiências. Nas últimas décadas, técnicas moleculares têm permitido a detecção de baixas cargas parasitárias de P. jirovecii, geralmente não detectáveis pelos métodos microscópicos clássicos. O objectivo deste estudo foi determinar a frequência da infecção por P. jirovecii em doentes Portugueses seronegativos para VIH com diferentes tipos de imunodeficiência, e seropositivos para VIH, de um hospital central comunitário de Lisboa, utilizando metodologias moleculares. Um total de 300 amostras respiratórias foram obtidas a partir de 274 (91,3%) doentes seronegativos para VIH e 26 (8,7%) seropositivos para VIH. Dos 274 seronegativos para VIH, as condições clínicas subjacentes incluem: 139 neoplasias, 45 doenças pulmonares obstructivas crónicas (DPOC), 37 pneumonias (não PPc), 17 tuberculoses, 16 doenças autoimunes, nove transplantados de órgão sólido e 11 com outras causas. Dos 26 doentes seropositivos para VIH, 10 apresentavam suspeita clínica da PPc e os restantes 16, outras causas clínicas. Todas as amostras foram estudadas por PCR em tempo real (RT-qPCR) tendo como alvo o gene nuclear de cópia única de P. jirovecii que codifica a protease serina Kexin (KEX1), e por nested-PCR dirigida ao gene mitocondrial multicópia que codifica a subunidade grande do rRNA (mtLSU rRNA) de P. jirovecii. DNA de P. jirovecii foi detectado em 119 (39,7%) doentes da população estudada (98, 35,8% seronegativos para VIH; 21, 80,8% seropositivos para VIH); 51 (36,7%) neoplasias, 20 (44,4%) DPOC, 9 (24,3%) pneumonias (não PPc), uma (5,9%) tuberculose, cinco (31,2%) doenças autoimunes, 8 (88,9%) transplantados de órgão sólido e quatro (36,4%) de outras causas. Entre os doentes seropositivos para VIH, DNA de P. jirovecii foi detectado em 10 (100%) com suspeita clínica de PPc e em 11 (68,8%) dos doentes com outras causas. Observou-se uma associação estatisticamente significativa entre os seronegativos para VIH submetidos a transplante de órgão sólido (P = 0.003) e os seropositivos para VIH (P <0.001) e a presença de DNA de P. jirovecii. A técnica de RT-qPCR detectou 55 amostras positivas (18,3%), e a nested-PCR 108 (36%). Uma concordância de resultados foi observada em 225 (75%) amostras. A RT-qPCR demonstrou uma especificidade de 94,3% e sensibilidade de 40,7%, com um valor preditivo positivo de 80%, tendo a nested-PCR como referência padrão. Verificou-se que, os valores de CT mais baixos corresponderam ao grupo dos doentes seronegativos para VIHsubmetidos a transplante de órgão e seropositivos para VIH sintomáticos para PPc. Este trabalho confirma a importância da colonização por P. jirovecii nos doentes seronegativos para VIH com diferentes tipos de imunodeficiência e seropositivos para VIH em ambiente hospitalar. Esta população encontra-se em risco de desenvolver PPc ou de transmitir o agente patogénico a outros doentes susceptíveis, e desempenhar um papel importante na circulação e transmissão de P. jirovecii na comunidade.