Desenvolvimento de novos potenciais anticancerígenos com ação no G-quadruplex

• Autor(a) principal: Santos, Diana Sofia Serra dos
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10400.6/6099
• topic: Agentes Anticancerígenos; Calixarenos; Citotoxicidade; G-Quadruplex; Morte Celular; Domínio/Área Científica::Engenharia e Tecnologia:: Outras Engenharias e Tecnologias

Atualmente, o cancro apresenta uma elevada mortalidade perante a população mundial e novas estratégias terapêuticas têm sido desenvolvidas com o objetivo de combater esta patologia. Recentemente verificou-se que uma das formas de diminuir a atividade dos genes tumorais é através da estabilização das estruturas do G-quadruplex. O G-quadruplex é uma estrutura de quatro cadeias formada por sequências específicas ricas em guanina e estão presentes em regiões de extrema importância biológica, como telómeros humanos e promotores de oncogenes. A sua estabilização pode ser obtida com compostos orgânicos de baixo peso molecular que promovem a inibição da atividade da enzima telomerase. Assim, o contexto deste trabalho foca-se no desenvolvimento de compostos derivados de calixarenos, capazes de se ligarem seletivamente ao G-quadruplex telomérico. Os compostos foram sintetizados, purificados e caraterizados por Ressonância Magnética Nuclear (RMN) e Espectometria de Massa (MS). A interação entre as estruturas G-quadruplex e os derivados de calixarenos foi estudada utilizando titulações de RMN de 1H, de modo a avaliar a estabilização do G-quadruplex a diferentes temperaturas e identificar os locais de ligação envolvidos na interação. O efeito dos compostos na proliferação das linhas celulares tumorais (MCF-7 e LNCaP) e normais (NHDF) foi avaliado pelo ensaio MTT, de modo a se poder concluir acerca do seu interesse como potenciais agentes anticancerígenos. Adicionalmente, a localização celular dos calixarenos foi avaliada por microscopia de fluorescência confocal e o estudo do mecanismo de morte celular por citometria de fluxo. Da síntese química resultaram vários intermediários e dois macrociclos, os quais foram posteriormente estudados. A formação e estabilidade da estrutura G-quadruplex foi seguida por RMN e observou-se que à temperatura de 65°C este desnaturou, passando à forma de duplex. Por microscopia de fluorescência, observou-se que os compostos macrociclos são fluorescentes e que, ao nível de localização celular, não se observou fluorescência no núcleo da célula com o composto Calix-Benz. Relativamente à avaliação biológica dos derivados de calixarenos pelo ensaio MTT, verificou-se existirem diferentes efeitos antiproliferativos. O composto que revelou ser mais tóxico para as várias linhas celulares foi o intermediário Calix-NH2, especialmente em células cancerígenas da próstata, uma vez que foram observados valores elevados de inibição da proliferação celular e IC50 de 1,474 µM, demonstrando também ser mais tóxico para estas células do que para as células normais da derme humana. Este mesmo composto não relevou marcação significativa pela Anexina V-FITC e originou valores significativos de morte celular em comparação com compostos padrão ativos contra o cancro da mama.