Perfil da citologia cervico-vaginal por citometria de fluxo

• Autor(a) principal: Mendes, Joana Rita Curralo
• Data de Publicação: 2009
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/8787
• topic: Biologia molecular; Citometria de fluxo; Vírus do papiloma humano

O cancro do colo do útero é uma das neoplasias mais frequentes a nível mundial. A infecção persistente por Vírus do Papiloma Humano (HPV) de alto risco foi demonstrada como o principal factor de risco para o desenvolvimento desta neoplasia maligna. Na luta contra o cancro, em particular o cancro do colo do útero, várias técnicas auxiliares de diagnóstico têm sido propostas para aumentar a precisão do rastreio citológico, nomeadamente a aplicação da citometria de fluxo (FCM). Esta é uma técnica objectiva, rápida e sensível, em que equipamentos mais avançados permitem, também, a separação física de citomas – separador celular activado por fluorescência (FACS). O objectivo geral deste trabalho visou o estudo das potencialidades de FCM na análise de citologia cervico-vaginal (CCV) em meio líquido, dada a pouca informação disponível nesta área. Embora as técnicas de rastreio actualmente utilizadas sejam fiáveis e rápidas, a utilização da FCM pode apresentar-se como uma técnica complementar, com a utilização das suas potencialidades de análise multiparamétrica. Neste estudo preliminar foram analisadas 54 amostras de CCVs fixados em meio líquido PreservCyt (ThinPrep®), divididos em 7 grupos de diagnóstico citológico, segundo classificação de Bethesda 2001: negativo para lesão intraepitelial ou malignidade (“NILM”), “NILM-Atrofia”; “NILM-Inflamação”; células pavimentosas atípicas de significado indeterminado (“ASC-US”); lesão intraepitelial de baixo grau (“LSIL”); lesão intraepitelial de alto grau (“HSIL”) e “Carcinoma epidermóide”. Os casos foram caracterizados, em FCM, relativamente à dispersão frontal e lateral da luz (FS e SS), intensidade de fluorescência com o marcador intercalar de DNA iodeto de propídio (IP), intensidade de marcação para o marcador específico CD45 e, ainda, procedeu-se à separação física de subpopulações por FACS. Nestes resultados preliminares e na abordagem inicial de casos do grupo citológico de “NILM”, detectaram-se duas subpopulações distintas em FS vs SS. Este perfil foi o predominante, contudo, variou em alguns dos grupos citológicos. Por exemplo, nos grupos “NILM-Atrofia” e “Carcinoma epidermóide” verificou-se uma distribuição dos eventos em “arrasto”, não permitindo uma distinção clara de subpopulações. A metodologia aplicada, segundo a sequência de: análise da dispersão da luz, marcação com IP, marcação com CD45 e FACS; mostrou-se até ao momento inconclusiva dado que, no final, as células das duas subpopulações mostraram ser do mesmo tipo celular (células pavimentosas). Por outro lado, embora não se tenha até ao momento estabelecido uma correlação entre as subpopulações obtidas por FCM e os grupos citológicos, o perfil de arrasto descrito pode dar informação sobre um possível diagnóstico citológico de “NILM-Atrofia”. Em função destes resultados inconclusivos e da literatura existente, está em curso um estudo mais alargado em termos de amostragem em meio líquido (e.g. diferentes meios/condições de preservação e diferentes anticorpos), no sentido de compreender os resultados obtidos em FCM e FACS, e explorar esta técnica como auxiliar de diagnóstico no rastreio do cancro do colo do útero.