Are translation-related proteins present and functionally active in sperm?

• Autor(a) principal: Corda, Pedro Oliveira
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: eng
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/26716
• topic: Tradução; Espermatozoide; Inibição da tradução; Surface sensing of translation

Os espermatozoides são células haploides altamente diferenciadas originadas a partir de sucessivas divisões mitóticas e meióticas – a espermatogénese. Durante este processo, o espermatozoide sofre alterações estruturais e funcionais a nível nuclear e citoplasmático. Devido a essas alterações, o silenciamento da expressão génica é amplamente aceite nos espermatozoides de mamíferos. Uma nova perspetiva surgiu quando a síntese de novas proteínas foi revelada em espermatozoides em condições capacitantes, gerando discussão sobre um dogma estabelecido. Assim, este trabalho visa caracterizar e avaliar a atividade translacional em espermatozoides em condições capacitantes. Para alcançar este objetivo foram realizadas abordagens a nível bioinformático e experimental. A análise bioinformática revelou a presença de 315 proteínas relacionadas com a tradução em espermatozoides. A análise simultânea dos processos biológicos e dos compartimentos celulares de cada proteína levou à identificação de 31 proteínas exclusivamente ligadas à tradução. Complementarmente, a análise da rede de interacção proteína-proteína revelou que estas 315 proteínas estão fortemente conectadas e interrelacionadas. Além disso, a análise de enriquecimento desta rede, para os processos biológicos e para os compartimentos celulares, evidenciou uma forte associação das proteínas com processos relacionados com a tradução e uma localização preferencial em regiões citoplasmáticas e mitocondriais. Experimentalmente, a técnica de SUnSET estabeleceu de forma inequívoca a existência de atividade translacional através da incorporação de puromicina nas cadeias nascentes de polipéptidos. Foi observada uma diminuição da incorporação de puromicina em condições com inibidores translacionais citoplasmáticos e mitocondriais, o que nos leva a acreditar na coexistência de ambas as formas de tradução no espermatozoide. Em suma, estes resultados evidenciam a existência de atividade translacional em espermatozoides de mamífero