Plexo coroideu: local de síntese de hormonas esteróides?
Autor(a) principal: | |
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Data de Publicação: | 2012 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) |
Texto Completo: | http://hdl.handle.net/10400.6/1084 |
Resumo: | O plexo coroideu (CP), uma estrutura altamente vascularizada, encontra-se dentro dos ventrículos do cérebro e é composto por vilosidades enroladas aos capilares, tecido conjuntivo e uma monocamada de células epiteliais ciliadas. O CP produz o líquido cefalorraquidiano (LCR) que mantém o meio extracelular do cérebro e forma uma interface única entre o sangue e o LCR. A biossíntese de esteroides ocorre na glândula adrenal, nas gónadas e no cérebro – neuroesteroides. Um trabalho desenvolvido anteriormente permitiu identificar várias enzimas da via esteroidogénica, pertencentes à família do citocromo P450 (CYP), hidroxiesteroide desidrogenase (HSD) e redutase, no CP de rato, através da análise de microarrays de cDNA. Portanto, o objetivo deste estudo foi confirmar e analisar a expressão do citocromo P450, família 11, subfamília a, polipéptido 1 (CYP11A1), citocromo P450, família 11, subfamília b, polipéptido 3 (CYP11B3), citocromo P450, família 17, subfamília a, polipéptido 1 (CYP17A1), 17β-hidroxiesteroide desidrogenase (17β-HSD), 5α-redutase (ST5ared) e citocromo P450, família 19, subfamília a, polipéptido 1 (CYP19A1) no CP de Rattus norvegicus e Sus domesticus. Assim, os níveis de expressão de mRNA destas enzimas foram analisados por RT-PCR e PCR em tempo real, enquanto os níveis proteicos foram analisados por imunocitoquímica e imunohistoquímica. Por fim, foi testada a funcionalidade destas enzimas em culturas ex vivo usando percursores tritiados da via esteroidogénica. Este trabalho permitiu-nos confirmar a expressão destas enzimas e determinar a sua localização nas células epiteliais do CP de rato e no CP de porco. Para além disso, os ensaios ex vivo mostraram que há síntese de hormonas esteroides a partir de percursores tritiados nos explantes de CP. |
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Plexo coroideu: local de síntese de hormonas esteróides?Plexo coroideu - Aspectos fisiológicosPlexo coroideu - Líquido cefalorraquidianoEsteroidogéneseEnzimas esteroidogénicasNeuroesteróidesHormonas esteróidesO plexo coroideu (CP), uma estrutura altamente vascularizada, encontra-se dentro dos ventrículos do cérebro e é composto por vilosidades enroladas aos capilares, tecido conjuntivo e uma monocamada de células epiteliais ciliadas. O CP produz o líquido cefalorraquidiano (LCR) que mantém o meio extracelular do cérebro e forma uma interface única entre o sangue e o LCR. A biossíntese de esteroides ocorre na glândula adrenal, nas gónadas e no cérebro – neuroesteroides. Um trabalho desenvolvido anteriormente permitiu identificar várias enzimas da via esteroidogénica, pertencentes à família do citocromo P450 (CYP), hidroxiesteroide desidrogenase (HSD) e redutase, no CP de rato, através da análise de microarrays de cDNA. Portanto, o objetivo deste estudo foi confirmar e analisar a expressão do citocromo P450, família 11, subfamília a, polipéptido 1 (CYP11A1), citocromo P450, família 11, subfamília b, polipéptido 3 (CYP11B3), citocromo P450, família 17, subfamília a, polipéptido 1 (CYP17A1), 17β-hidroxiesteroide desidrogenase (17β-HSD), 5α-redutase (ST5ared) e citocromo P450, família 19, subfamília a, polipéptido 1 (CYP19A1) no CP de Rattus norvegicus e Sus domesticus. Assim, os níveis de expressão de mRNA destas enzimas foram analisados por RT-PCR e PCR em tempo real, enquanto os níveis proteicos foram analisados por imunocitoquímica e imunohistoquímica. Por fim, foi testada a funcionalidade destas enzimas em culturas ex vivo usando percursores tritiados da via esteroidogénica. Este trabalho permitiu-nos confirmar a expressão destas enzimas e determinar a sua localização nas células epiteliais do CP de rato e no CP de porco. Para além disso, os ensaios ex vivo mostraram que há síntese de hormonas esteroides a partir de percursores tritiados nos explantes de CP.The choroid plexus (CP), a highly vascularized structure, lies within the ventricles of the brain and is composed by convoluted villi with capillaries, connective tissue and a monolayer of ciliated epithelial cells. CP produces the cerebrospinal fluid (CSF) that maintains the extracellular milieu of the brain and form a unique interface between the peripheral blood and the CSF. Steroid biosynthesis occurs in the adrenal gland, in the gonads and, in the brainneurosteroids. In previous work found that several enzymes of the steroidogenic pathway, which belong to the family of cytochrome P450 (CYP), hydroxysteroid dehydrogenase (HSD) and reductase are expressed in CP by cDNA microarray analysis. So, the aim of this study was to confirm and analyse the expression of cytochrome P450, family 11, subfamily a, polypeptide 1 (CYP11A1), cytochrome P450, family 11, subfamily b, polypeptide 3 (CYP11B3), cytochrome P450, family 17, subfamily a, polypeptide 1 (CYP17A1), hydroxysteroid (17-β) dehydrogenase 8 (17β-HSD8), steroid-5-α-reductase (ST5ared) and cytochrome P450, family 19, subfamily a, polypeptide a (CYP19A1) in CP of Rattus norvegicus and Sus domesticus. mRNA expression levels of these enzymes were evaluated by RT-PCR and Real-time PCR, while protein levels were evaluated by immunocytochemistry and immunohistochemistry. Finally, we tested the functionality of these enzymes ex-vivo using tritiated percursors of the steroidogenic pathway. We were able to confirm the expression of these enzymes and determine their location in CP epithelial cells of rat and pig CP. Moreover, ex-vivo assays showed that steroid hormones synthesis from tritiated precursors occurs in CP explants.Universidade da Beira InteriorSantos, Cecília Reis Alves dosPaixão, Telma Alexandra QuintelauBibliorumPatriarca, Filipa Marina Pinheiro2013-03-22T10:28:16Z2012-062012-06-01T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10400.6/1084porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2023-12-15T09:36:33Zoai:ubibliorum.ubi.pt:10400.6/1084Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-20T00:43:00.918169Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse |
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O plexo coroideu (CP), uma estrutura altamente vascularizada, encontra-se dentro dos ventrículos do cérebro e é composto por vilosidades enroladas aos capilares, tecido conjuntivo e uma monocamada de células epiteliais ciliadas. O CP produz o líquido cefalorraquidiano (LCR) que mantém o meio extracelular do cérebro e forma uma interface única entre o sangue e o LCR. A biossíntese de esteroides ocorre na glândula adrenal, nas gónadas e no cérebro – neuroesteroides. Um trabalho desenvolvido anteriormente permitiu identificar várias enzimas da via esteroidogénica, pertencentes à família do citocromo P450 (CYP), hidroxiesteroide desidrogenase (HSD) e redutase, no CP de rato, através da análise de microarrays de cDNA. Portanto, o objetivo deste estudo foi confirmar e analisar a expressão do citocromo P450, família 11, subfamília a, polipéptido 1 (CYP11A1), citocromo P450, família 11, subfamília b, polipéptido 3 (CYP11B3), citocromo P450, família 17, subfamília a, polipéptido 1 (CYP17A1), 17β-hidroxiesteroide desidrogenase (17β-HSD), 5α-redutase (ST5ared) e citocromo P450, família 19, subfamília a, polipéptido 1 (CYP19A1) no CP de Rattus norvegicus e Sus domesticus. Assim, os níveis de expressão de mRNA destas enzimas foram analisados por RT-PCR e PCR em tempo real, enquanto os níveis proteicos foram analisados por imunocitoquímica e imunohistoquímica. Por fim, foi testada a funcionalidade destas enzimas em culturas ex vivo usando percursores tritiados da via esteroidogénica. Este trabalho permitiu-nos confirmar a expressão destas enzimas e determinar a sua localização nas células epiteliais do CP de rato e no CP de porco. Para além disso, os ensaios ex vivo mostraram que há síntese de hormonas esteroides a partir de percursores tritiados nos explantes de CP. |
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