New target therapies in hepatocellular carcinoma : a study in cell lines in culture

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Araújo, Ana Maria Faria
Data de Publicação: 2010
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: eng
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10316/26900
Resumo: Trabalho final do 6º Ano Médico com vista à atribuição do grau de Mestre no âmbito do Ciclo de Estudos de Mestrado Integrado em Medicina
id RCAP_b5f4c0dd3b86380160b6df43646e26ad
oai_identifier_str oai:estudogeral.uc.pt:10316/26900
network_acronym_str RCAP
network_name_str Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
repository_id_str 7160
spelling New target therapies in hepatocellular carcinoma : a study in cell lines in cultureCarcinoma hepatocelularInibidor do mTORVias de sinalizaçãoLinha celular HUH-7Inibidor do proteasomaInibidor da farnesiltransferaseHepatocellular carcinomamTOR inhibitorMolecular pathwaysHUH-7 cell lineFarnesyltransferase inhibitorProteasome inhibitorTrabalho final do 6º Ano Médico com vista à atribuição do grau de Mestre no âmbito do Ciclo de Estudos de Mestrado Integrado em MedicinaO carcinoma hepatocelular é uma doença complexa e devastadora que se mantém resistente à quimioterapia convencional. O desenvolvimento de fármacos dirigidos às vias moleculares envolvidas na sobrevivência e proliferação das células neoplásicas, bem como a sua associação aos agentes convencionais poderá constituir uma nova abordagem no tratamento do carcinoma hepatocelular. O objectivo do presente estudo consiste na avaliação do potencial terapêutico dos novos fármacos dirigidos a alvos moleculares, nomeadamente os inibidores do proteasoma (MG-262), da farnesiltransferase (L-744832) e do mTOR (Everolimus), em monoterapia e em combinação com os agentes da quimioterapia convencional 5-Fluorouracilo e Doxorrubicina, em células de carcinoma hepatocelular em cultura, HUH-7. Para atingir estes objectivos, as células HUH-7 foram incubadas com concentrações crescentes de MG-262, L-744832 e Everolimus em monoterapia e em associação com 5-Fluorouracilo e Doxorrubicina durante diferentes intervalos de tempo. A viabilidade celular foi avaliada pelo teste Alamar Blue e o tipo de morte celular por microscopia óptica e citometria de fluxo, recorrendo à dupla marcação com anexina V e iodeto de propídio. Os mecanismos moleculares envolvidos na acção e citotoxicidade dos fármacos, nomeadamente, a expressão de conjugados de ubiquitina, lamininas A/C, ciclina D1 e de proteínas relacionadas com a morte celular (BAX e BCL2) foram também analisados por citometria de fluxo através de anticorpos monoclonais ligados a fluorocromos. Os resultados obtidos indicam que o MG-262, o L-744832 e o Everolimus têm um efeito antiproliferativo e citotóxico em monoterapia que varia em função da dose utilizada e do tempo de incubação. Induzem morte celular principalmente por apoptose, a qual poderá estar relacionada com o aumento da razão BAX/BCL-2. Às 48h, o IC50 é, respectivamente, 100nM (MG-262), 77μM (L-744832) e 18μM (Everolimus). A combinação destes fármacos com os agentes terapêuticos convencionais demonstra aumento do efeito antiproliferativo para doses inferiores ao IC50 (sinergismo de adição). Além disso, o efeito citotóxico foi observado apenas nas associações do MG-262 com os fármacos da quimioterapia convencional. Este estudo sugere que os inibidores do proteasoma, os inibidores da farnesiltransferase e os inibidores do mTOR poderão constituir uma alternativa terapêutica no tratamento do carcinoma hepatocelular tanto em monoterapia como em associação com os fármacos convencionais. A escolha de um esquema terapêutico adequado será também crucial para o sucesso do tratamento.Hepatocellular carcinoma is a complex and devastating disease which remains highly resistant to commonly used systemic chemotherapy. Alternative treatment strategies focus on specific pathways involved in malignant cell survival and proliferation, as well as combination of different targeted therapies with conventional anticarcinogenic agents may open new horizons in hepatocellular carcinoma therapy. The aim of the present study is to test the therapeutic potential of new targeted drugs in hepatocellular carcinoma, namely the proteasome (MG-262), farnesiltransferase (L-744832) and m-TOR (Everolimus) inhibitors, in monotherapy and in combination with conventional anticarcinogenic agents, 5-Fluorouracil and Doxorrubicin, in the hepatocellular carcinoma cell line, HUH-7. To attaint this purpose, the HCC cell line, HUH-7 cells, were incubated with increasing concentrations of MG-262, L-744832 and Everolimus, both as single agents and in association with 5-Fluorouracil and Doxorrubicin, during different periods of time. Cell viability was evaluated by the Alamar Blue assay and cell death by optic microscopy and flow citometry using annexin V and propidium iodide incorporation. The molecullar mechanisms involved in drug citotoxicity, namely the expression of ubiquitin conjugates, laminin A/C, cyclin D1 and proteins related to cell death (BAX and BCL2), were analysed by flow cytometry using monoclonal antibodies labeled with fluorochromes. The obtained results show that MG-262, L-744832 and Everolimus have an antiproliferative and cytotoxic effect in monotherapy, depending on the applied dose and incubation period, inducing cell death mainly by apoptosis that may be related with the increase in BAX/BCL-2 ratio. The IC50 at 48h for each drug is: MG-262=100nM, L-744832=77μM, Everolimus=18μM. The combination of MG-262, L-744832 and Everolimus with conventional anticarcinogenic drugs reveals an increase in antiproliferative effect for lower doses than the IC50 (addition synergism). However, the cytotoxic effect is only observed with MG-262 in association with the conventional anticarcinogenic drugs. These results suggest that proteasome, farnesiltransferase and mTOR inhibitors may constitute a new potential therapeutic approach in HCC not only in monotherapy, but also in association with conventional therapies. The choice of an optimal drug schedule will also be crucial to the success of the therapy.This work was supported by a grant from GAPI – Office for Support of Investigational Projects, Faculty of Medicine of the University of Coimbra and Callouste Gulbenkian Foundation, Portugal.2010info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisARAÚJO, Ana Maria Faria - New target therapies in hepatocellular carcinoma : a study in cell lines in culture. Coimbra : [s.n.], 2010. Trabalho final do 6º Ano Médico no âmbito do Ciclo de Estudos de Mestrado Integrado em Medicina. Disponível na WWW: http://hdl.handle.net/10316/26900http://hdl.handle.net/10316/26900ARAÚJO, Ana Maria Faria - New target therapies in hepatocellular carcinoma : a study in cell lines in culture. Coimbra : [s.n.], 2010. Trabalho final do 6º Ano Médico no âmbito do Ciclo de Estudos de Mestrado Integrado em Medicina. Disponível na WWW: http://hdl.handle.net/10316/26900http://hdl.handle.net/10316/26900engAraújo, Ana Maria Fariainfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2022-01-20T17:48:45Zoai:estudogeral.uc.pt:10316/26900Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-19T20:44:39.818575Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
dc.title.none.fl_str_mv New target therapies in hepatocellular carcinoma : a study in cell lines in culture
title New target therapies in hepatocellular carcinoma : a study in cell lines in culture
spellingShingle New target therapies in hepatocellular carcinoma : a study in cell lines in culture
Araújo, Ana Maria Faria
Carcinoma hepatocelular
Inibidor do mTOR
Vias de sinalização
Linha celular HUH-7
Inibidor do proteasoma
Inibidor da farnesiltransferase
Hepatocellular carcinoma
mTOR inhibitor
Molecular pathways
HUH-7 cell line
Farnesyltransferase inhibitor
Proteasome inhibitor
title_short New target therapies in hepatocellular carcinoma : a study in cell lines in culture
title_full New target therapies in hepatocellular carcinoma : a study in cell lines in culture
title_fullStr New target therapies in hepatocellular carcinoma : a study in cell lines in culture
title_full_unstemmed New target therapies in hepatocellular carcinoma : a study in cell lines in culture
title_sort New target therapies in hepatocellular carcinoma : a study in cell lines in culture
author Araújo, Ana Maria Faria
author_facet Araújo, Ana Maria Faria
author_role author
dc.contributor.author.fl_str_mv Araújo, Ana Maria Faria
dc.subject.por.fl_str_mv Carcinoma hepatocelular
Inibidor do mTOR
Vias de sinalização
Linha celular HUH-7
Inibidor do proteasoma
Inibidor da farnesiltransferase
Hepatocellular carcinoma
mTOR inhibitor
Molecular pathways
HUH-7 cell line
Farnesyltransferase inhibitor
Proteasome inhibitor
topic Carcinoma hepatocelular
Inibidor do mTOR
Vias de sinalização
Linha celular HUH-7
Inibidor do proteasoma
Inibidor da farnesiltransferase
Hepatocellular carcinoma
mTOR inhibitor
Molecular pathways
HUH-7 cell line
Farnesyltransferase inhibitor
Proteasome inhibitor
description Trabalho final do 6º Ano Médico com vista à atribuição do grau de Mestre no âmbito do Ciclo de Estudos de Mestrado Integrado em Medicina
publishDate 2010
dc.date.none.fl_str_mv 2010
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/masterThesis
format masterThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv ARAÚJO, Ana Maria Faria - New target therapies in hepatocellular carcinoma : a study in cell lines in culture. Coimbra : [s.n.], 2010. Trabalho final do 6º Ano Médico no âmbito do Ciclo de Estudos de Mestrado Integrado em Medicina. Disponível na WWW: http://hdl.handle.net/10316/26900
http://hdl.handle.net/10316/26900
ARAÚJO, Ana Maria Faria - New target therapies in hepatocellular carcinoma : a study in cell lines in culture. Coimbra : [s.n.], 2010. Trabalho final do 6º Ano Médico no âmbito do Ciclo de Estudos de Mestrado Integrado em Medicina. Disponível na WWW: http://hdl.handle.net/10316/26900
http://hdl.handle.net/10316/26900
identifier_str_mv ARAÚJO, Ana Maria Faria - New target therapies in hepatocellular carcinoma : a study in cell lines in culture. Coimbra : [s.n.], 2010. Trabalho final do 6º Ano Médico no âmbito do Ciclo de Estudos de Mestrado Integrado em Medicina. Disponível na WWW: http://hdl.handle.net/10316/26900
url http://hdl.handle.net/10316/26900
dc.language.iso.fl_str_mv eng
language eng
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informação
instacron:RCAAP
instname_str Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informação
instacron_str RCAAP
institution RCAAP
reponame_str Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
collection Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
repository.name.fl_str_mv Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informação
repository.mail.fl_str_mv
_version_ 1817551522160967680

Registros relacionados