Avaliação das células T reguladoras por citometria de fluxo

• Autor(a) principal: Cardoso, Emília Maria dos Santos
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/12028
• topic: Biologia molecular - Teses de mestrado; Mecanismos de controlo celular; Citometria de fluxo; Imunidade celular; Tolerância (Fisiologia); Artrite reumatoide

Introdução: As doenças auto-imunes são, no seu conjunto, altamente incapacitantes e mortais, sobretudo no sexo feminino. Na última década, foi possível associar estas patologias com uma subpopulação de linfócitos T CD4+- Treg - responsável pela manutenção da tolerância periférica através de mecanismos de regulação/supressão imunológica. Atualmente é possivel quantificar as Treg através da deteção do fator de transcrição FoxP3, por citometria de fluxo (CMF). Mais recentemente, alguns autores defendem que a marcação de superfície com a IL-R7α (CD127) poderá substituir a marcação intracelular com FoxP3. Contudo, ainda persistem dúvidas relativamente ao fenótipo que possibilita a sua deteção, de forma mais simples e eficaz. Materiais e Métodos: O projeto inclui 27 amostras de dadores saudáveis e 11 doentes com Artrite Reumatóide. A imunofenotipagem dos linfócitos foi efetuada por CMF , com recurso aos anticorpos anti-CD4 ECD, anti-CD25 FITC, anti-CD127 CY5 (Beckman Coulter) e anti-FoxP3 PE (eBioscience). Resultados: Amostragem de dadores saudáveis - CD4+CD25+FoxP3+3,60±2,30%; CD4+CD25+CD127-/low 4,35±1,82%; CD4+CD25++FoxP3+1,43±0,77%; CD4+CD25++CD127-/low 1,75±0,85%. Amostragem de doentes - CD4+CD25+FoxP3+ 2,37±0,85%;CD4+CD25+CD127-/low 3,90±1,89%; CD4+CD25++FoxP3+ 1,43±0,65%; CD4+CD25++CD127-/low 2,39±1,36%. Não foram observadas diferenças significativas entre os marcadores CD127 e FoxP3, e entre dadores e doentes, com P<0,05. Conclusão: A quantificação da população das Treg recorrendo à marcação de superfície com CD127 poderá ser uma alternativa fiável à utilização de FoxP3. Contudo, as características inerentes à expressão contínua de CD127 e CD25 dificultam o procedimento técnico. Os valores de referência obtidos no estudo revelaram-se inferiores aos descritos na literatura. Fato, que obriga a um aumento de amostragem para uma correta validação da metodologia.