Caracterização da composição de exossomas excretados a partir de modelos celulares 2D e 3D derivados de células de carcinoma colorretal sensíveis ou resistentes à doxorrubicina

• Autor(a) principal: Luz, André Filipe Machado da
• Data de Publicação: 2022
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10362/132743
• topic: Exossomas; Cancro colorretal; Proteínas; RNA; Domínio/Área Científica::Engenharia e Tecnologia::Outras Engenharias e Tecnologias

O cancro é uma doença que afeta em larga escala a população humana, sendo que um dos mais se destaca pela sua malignidade é o cancro colorretal devido à sua elevada incidência e mortalidade em ambos os géneros. Resultante de uma necessidade de identificação de biomarcadores para um diagnóstico precoce da doença ou biomarcadores de resistência a agentes quimioterapêuticos uma nova tecnologia de diagnostico tem surgido, as designadas biopsias líquidas, através das quais ocorre uma obtenção de amostras biológicas de uma forma não invasiva a partir da qual são analisados componentes derivados dos tumores. Um desses componentes são os exossomas, nanovesículas membranares excretadas por todo o tipo de células, que possuem um papel essencial na comunicação celular devido à sua capacidade de modular a resposta fenotípica das células recetoras através da transferência de biomoléculas ativas tais como proteínas, ácidos nucleicos e lípidos. A presente tese teve como objetivo principal uma caracterização da composição dos exossomas em termos proteicos e de RNA excretados a partir de modelos celulares 2D e 3D derivados de células de carcinoma colorretal sensíveis ou resistentes à doxorrubicina de modo a perceber se estas nanovesículas podem possuir um papel na indução ou manutenção da resistência a fármacos entre células. Um outro objetivo focava-se na perceção do efeito da maior complexidade dos modelos 3D na composição dos exossomas tendo em conta que estes permitem uma maior mimetização do microambiente tumoral in vivo. A análise dos conteúdos proteicos mostrou que as diferenças de expressão proteica estavam, de um modo geral, associadas à proliferação celular e a organização estrutural, quer do citoesqueleto quer da matriz extracelular. Por outro lado, a análise por RNA-seq permitiu observar variações entre as condições testadas maioritariamente associadas a processos metabólicos e ao ciclo celular. A partir da integração dos resultados da proteómica com os da transcritómica foi possível concluir que as principais variações no conteúdo dos exossomas provenientes das células sensíveis e resistentes à doxorrubicina (modelos 2D) estavam correlacionadas com o crescimento celular e com a resposta a compostos orgânicos. O aumento de determinados genes envolvidos com a resposta a compostos orgânicos, como é o caso do ALDH1A3, podem ser diretamente correlacionado com a presença e resistência ao composto orgânico. Já para o caso dos exossomas derivados da linha sensível em modelos 2 e 3D, as principais diferenças nos constituintes dos exossomas entre as condições estavam relacionadas com a matriz extracelular e com processos metabólicos, que podem ser explicadas pelas diferenças no crescimento e interação celular associada a cada modelo.