Optimization of HIV residual viremia quantification: applications for HIV cure studies

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Mateus, Ana Raquel de Sousa Saraiva
Data de Publicação: 2019
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: eng
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10451/43395
Resumo: Trabalho Final de Mestrado Integrado, Ciências Farmacêuticas, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia, 2019
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spelling Optimization of HIV residual viremia quantification: applications for HIV cure studiesHIV-1Residual viremiaLatencyUltrasensitive PCRMestrado Integrado - 2019Ciências da SaúdeTrabalho Final de Mestrado Integrado, Ciências Farmacêuticas, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia, 2019O Vírus da Imunodeficiência Humana tipo 1 é um dos maiores desafios relacionados com a saúde a nível global, sendo que, no final de 2018, aproximadamente 37,9 milhões de pessoas estavam infetadas pelo vírus. Em 1996 foi desenvolvida uma nova estratégia terapêutica para a infeção com o HIV que consistia na combinação de diferentes classes de fármacos antirretrovíricos. Com o desenvolvimento desta terapêutica mais eficaz houve uma redução substancial das mortes associadas à infeção pelo HIV. Esta estratégia faz com que a carga viral sanguínea diminua rapidamente, abaixo do limite de deteção, e, ao mesmo tempo, impede que ocorra replicação viral. Apesar desta terapêutica antirretrovírica combinada ser altamente eficaz, esta não é curativa devido a diferentes mecanismos que contribuem para a persistência do HIV. Este vírus infeta tanto células ativadas com células em repouso, integrando permanentemente o seu genoma na célula hospedeira. Os reservatórios latentes do HIV-1 estabelecem-se no início da infeção primária e esta é uma das principais barreiras para a erradicação do vírus, mesmo na presença de uma terapêutica otimizada. Assim, um dos focos fundamentais dos estudos relacionados com a cura da infeção pelo HIV-1 são os reservatórios latentes do vírus, sendo o desenvolvimento de um método rápido e preciso para a quantificação dos mesmo um passo essencial para a descoberta de uma cura. Portanto, uma correta quantificação da carga viral e da dimensão dos reservatórios do vírus são cruciais nos estudos da área, sendo também importante aumentar a sensibilidade dos métodos usados. O método mais utilizado para a quantificação da carga viral no plasma de indivíduos seropositivos sob terapia antirretrovírica é técnica de PCR que tem como alvo as regiões conservadas do genoma do HIV-1, sendo um exemplo deste método o teste COBAS AmpliPrep/ COBAS TaqMan HIV-1, versão 2.0. Este método quantifica ácidos nucleicos do vírus em células mononucleares do sangue periférico e avalia a carga viral e, neste estudo, foi desenvolvido um protocolo otimizado de preparação das amostras de plasma para aumentar a sensibilidade da técnica. Os resultados demonstraram que a recolha um maior volume de sangue dos doentes, a ultracentrifugação do plasma e o tratamento das amostras de plasma com DNase I permitiram obter resultados mais exatos e autênticos de carga viral. Deste modo, a modificação de métodos comerciais que quantificam a carga viral de HIV pode contribuir para o progresso nos estudos relacionados cura da infeção por HIV.Human Immunodeficiency Virus type 1 (HIV-1) is one of the most serious health challenges worldwide and at the end of 2018 approximately 37.9 million people lived with HIV. In 1996 was developed a new therapeutic strategy for HIV infection that consist in the combination of different antiretroviral drugs and, with the development of effective cART, occurred a substantial reduction in deaths associated with the virus. This therapy rapidly decreases plasma viral load below the limit of detection and, at the same time, prevents viral replication. Although cART is highly effective it is not curative due to several mechanisms contribute to HIV persistence. HIV-1 can infect both activated and resting cells, which the viral genome can be permanently integrated into a host cell chromosome. Latent HIV-1 reservoirs are established early during primary infection and are a major barrier to eradication, even in the presence of highly active cART. Targeting this latent reservoir is one of the main focus of HIV- 1 cure investigation, and the development of a rapid and accurate assay for the reservoir quantification is an essential step in the search for a cure. Thereby, correct quantification of residual viremia and of the viral reservoir size are crucial in HIV-1 eradication studies and is important to increase the sensibility of the methods used. The most commonly used assays are standard PCR assays targeting conserved regions of HIV-1 genome and has been widely used to quantify plasma viremia in individuals on antiretroviral therapy, as the Roche COBAS AmpliPrep/ COBAS TaqMan HIV-1 test v2.0. Since this assay is used to quantify cell-associated HIV-1 nucleic acid in peripheral blood mononuclear cells from seropositive patients and assess the existing viral load, an optimized protocol for the sample’s preparation was developed to enhance the sensitivity of the technique. The results show that collecting a larger volume of blood from the patients, plasma ultracentrifugation and the treatment of the plasma samples with DNase I allowed achieve a more accurate result of HIV-1 residual viremia quantification. Thus, modification of commercial assays that quantify HIV residual viremia could contribute to the progress in HIV cure studies.Laboratório de Referência da SIDA, Centro Hospitalar Universitário de Liège, Hospital Cuf Infante Santo, Farmácia BeloGilles, DarcisVaira, DoloresPereira, José Miguel AzevedoRepositório da Universidade de LisboaMateus, Ana Raquel de Sousa Saraiva2020-05-04T22:58:54Z2019-12-052019-11-142019-12-05T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10451/43395TID:202475158enginfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2023-11-08T16:43:50Zoai:repositorio.ul.pt:10451/43395Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-19T21:56:12.816660Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
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