Análise do efeito da cetamina no desenvolvimento embrionário de peixe-zebra (Danio rerio) por avaliação da expressão génica

• Autor(a) principal: Serafim, Cindy Marlene Mesquita
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10348/8023
• topic: Peixe-Zebra (Danio rerio); Cetamina; Desenvolvimento embrionário; Stresse oxidativo; Expressão génica

O uso de vertebrados não mamíferos como organismos modelo tem-se revelado útil em diversas áreas de investigação. Destes, o peixe-zebra (Danio rerio) ganhou grande destaque na comunidade científica dado estar bem caracterizado e o seu genoma possuir uma grande homologia com o genoma dos restantes vertebrados. A cetamina, considerada um contaminante emergente e usada como droga de recreação, continua a ser utilizada em medicina humana e veterinária, apesar do seu uso ser bastante controverso. Este trabalho teve como objetivo a análise dos efeitos provocados pela cetamina ao nível da expressão de grupos de genes conservados entre vertebrados, incluindo o homem. Para tal foram feitas exposições curtas (20 minutos) durante as fases de blástula, gástrula e segmentação às concentrações de cetamina 0,2, 0,4 e 0,8 mg/mL e uma exposição longa (24 horas) durante a fase de blástula às concentrações de cetamina 0,05, 0,07 e 0,09 mg/mL. A expressão dos genes de desenvolvimento sonic hedgehog a (shha) e noggin3 (nog3), dos genes de stresse oxidativo glutamato-cisteína ligase, subunidade catalítica (gclc) e glutationa S-transferase pi 1 (gstp1) e dos genes das subunidades dos recetores N-Metil-D-Aspartato grin1 e grin2d foi analisada por PCR em tempo real quantitativo em amostras de RNA isoladas a partir de pools de embriões/larvas de peixe-zebra com 4, 8, 24, 72 e 144 horas. Após exposição a cetamina, o gene shha mostrou uma sobre-expressão generalizada, podendo esta alteração estar a comprometer o estabelecimento normal do padrão de desenvolvimento embrionário. O nog3 apresentou também uma sobre-expressão generalizada, associada a uma diminuição de expressão acentuada às 72 horas pós-fertilização; tais resultados parecem revelar uma tentativa de resgate do normal desenvolvimento esquelético do embrião. Os genes gclc e gstp1 pelo contrário apresentaram uma sub-expressão generalizada que poderá ser resultado da disrupção do sistema de defesa antioxidante ou, contrariamente, da estimulação excessiva deste. As variações na expressão dos genes das subunidades dos recetores NMDA grin1 e grin2d foram específicos da fase de desenvolvimento durante a qual ocorreu a exposição, tendo-se observado diminuições e aumentos de expressão génica. A análise destes três grupos de genes permitiu observar que a cetamina provoca variações de expressão estatisticamente significativas, podendo estar a comprometer o normal desenvolvimento embrionário do peixe-zebra, revelando desta forma o seu potencial tóxico e teratogénico.