Recuperação de material biológico a partir do RapidHIT™ ID System

• Autor(a) principal: Vieira, Beatriz Gameiro
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10362/163523
• topic: RapidHIT™ ID System; cartridge de amostra; genética forense; DNA; extração de DNA; purificação de DNA; Domínio/Área Científica::Engenharia e Tecnologia::Outras Engenharias e Tecnologias

O RapidHIT™ ID, da Applied Biosystems, agiliza a análise forense de amostras de DNA e responde à necessidade de obtenção de resultados rápidos. O vestígio é colocado num cartridge de amostra, onde ocorre extração de DNA e amplificação por PCR. O RapidHIT™ ID realiza eletroforese capilar, obtendo-se perfis STR em 90-110 minutos. O presente projeto, realizado no setor de biologia do Laboratório da Polícia Científica da Polícia Judiciária, visava desenvolver um protocolo de recuperação de material biológico do cartridge do RapidHIT™ ID, para posterior processamento através do processamento analítico habitual, que inclui diversas etapas essenciais: Extração e purificação de DNA; Quantificação de DNA; Amplificação de DNA por PCR; Eletroforese capilar. Com o desenvolvimento deste protocolo de recuperação de material biológico, pretendia-se obter uma metodologia que per-mitisse obter perfis STR de boa qualidade, quando estes não foram obtidos através do Ra-pidHIT™ ID. Começou-se por entender o circuito interno do cartridge de amostra, e mapear a locali-zação de reagentes e componentes no seu interior. A identificação de locais de interesse per-mitiu a recolha de material biológico do cartridge, que foi determinante para desenvolver a etapa inicial de recuperação de material biológico, e estabelecer o tipo de amostras a recolher. Desenvolveram-se vários processamentos analíticos modificados, em que era alterada uma ou mais etapas do habitual processamento analítico, para melhorar a qualidade dos per-fis STR obtidos. Os resultados obtidos permitiram concluir que a extração e purificação, am-plificação por PCR e eletroforese capilar eram fundamentais para a obtenção de resultados. Também se evidenciou que a quantificação de algumas amostras recolhidas era incompatível com o equipamento de quantificação do LPC, pois não refletia a sua quantidade real de DNA. Numa última abordagem, através da diluição de amostras de DNA, melhorou-se considera-velmente a eficácia do protocolo de recuperação, traduzindo-se numa melhoria da qualidade dos perfis STR.