Restrição de Glucose na Linha Celular do Plexo Coroide de Rato (Células Z310): Efeito na Remoção do Péptido ß-amiloide

• Autor(a) principal: Neves, Flávio Ramos das
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10400.6/5595
• topic: Doença de Alzheimer; Glucose; Linha Celular Z310; Metabolismo.; Plexo Coroide; Restrição Calórica; ß-Amiloide; Domínio/Área Científica::Ciências Médicas::Ciências Biomédicas

O metabolismo anormal da glucose sistémica é um dos fatores patológicos que influenciam o início e progressão da doença de Alzheimer. A formação de produtos de glicação avançada (AGE), o aumento do nível de espécies reativas de oxigénio (ROS), e consequentemente, do stress oxidativo provocam a disfunção mitocondrial, levando à acumulação do péptido ß-amiloide (Aß). O plexo coroide (CP) tem um papel fundamental na remoção do Aß do líquido cefalorraquidiano (CSF), evitando a sua acumulação e consequente morte neuronal e declínio cognitivo. A restrição calórica (RC) tem sido apontada como um fator relevante de intervenção nesta patologia. A RC contribui para que haja uma reprogramação metabólica, nomeadamente aumentando a biogénese mitocondrial, reduzindo a produção de ROS promovendo o aumento da capacidade respiratória e, consequentemente, a capacidade de sobrevivência em condições adversas. No entanto, nenhum estudo avaliou até agora o efeito da RC em células de CP, de forma a perceber se esta condição tem um efeito positivo na remoção de Aß. O objetivo deste trabalho foi avaliar de que forma alguns processos biológicos como a apoptose, a atividade mitocondrial e a produção de ROS na linha celular de CP – células Z310 - variam com a RC, e como esses processos podem interferir na remoção de Aß. Começámos por caracterizar o perfil metabólico da linha celular Z310 através da analise da expressão dos genes dos transportadores de glucose, Glut1 e Glut4, dos intervenientes na via de sinalização da insulina, IGF1 e IRS1, por PCR, e a localização e presença das respetivas proteínas por imunocitoquímica (IC). De seguida definimos o perfil de restrição calórica ótimo, recorrendo à determinação da viabilidade celular com azul de tripano e análise da expressão diferencial dos genes biomarcadores de restrição PGC-1a e Hsp105 por real time PCR, em que se verificou que o perfil ótimo foi de 1,5 gL-1 de glucose durante 48 horas. Posteriormente foram avaliados através de ensaios TUNEL e IC à Casp 3, parâmetros de apoptose celular, e, através da IC da Cox IV, sonda MitoSOX e DCFDA parâmetros de atividade mitocondrial e stress oxidativo com e sem estimulo com Aß. A partir dessa análise concluiu-se que a RC ótima melhora a função mitocondrial, levando à redução da produção mitocondrial de espécies superóxido bem como à inibição da ativação da via apoptótica, sem que haja variação de atividade mitocondrial. Não obstante, a RC sinergicamente com o estímulo de Aß potencia quer a atividade mitocondrial quer a produção de ROS. Finalmente a análise densitométrica às bandas de Aß obtidas por western blot dos distintos meios em RC não revela diferença nas concentrações finais de Aß remanescente no meio. Desta forma não ficou demonstrado que a RC aumenta a remoção do Aß pelas células Z310.