Optimização da produção de scFv anti-LDL(-) por Pichia pastoris

• Autor(a) principal: Silva, Pedro Ricardo Ferreira
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/11450
• topic: Biotecnologia ambiental; Indústria farmacêutica; Proteínas recombinantes; Crescimento celular; Leveduras; Gliceróis

Foram avaliadas, em frasco Erlenmeyer e em bio-reactor, as vantagens da alimentação escalonada de fontes de carbono, glicerol e sorbitol, complementares ao metanol na fase de indução de produção. A concentração máxima do fragmento de anticorpo monoclonal recombinante scFv anti-LDL(-) obtida após 120h de tempo de cultivo foi de 148,7 ± 18,3 mg.L-1 para os cultivos aos quais foi adicionado glicerol, assim como a concentração celular mais elevada no final do cultivo, de 15,6 ± 1,1 g.L-1. Nos estudos realizados em bio-reactor, observou-se uma taxa específica de crescimento máxima de μmáx=0,43h-1, nas primeiras 6h de cultivo. No final do tempo de cultivo, foram obtidas concentrações celulares na ordem dos 30 g.L-1. Estudo adicional foi realizado para avaliar a influência de casminoácidos e FenilMetanoSulfonilFluoreto (PMSF) na produção de scFv ant-LDL(-). A adição de casaminoácidos revelou-se mais significativa do que a adição de PMSF, na produção de scFv anti-LDL(-).