Determinação dos padrões de transcrição da sequência FA-SAT em células proliferativas: modelo celular carnivora

• Autor(a) principal: Escudeiro, Ana Cláudia Brandão Gomes Paulo
• Data de Publicação: 2015
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10348/5295
• topic: DNA satélite; Cromossomas; Perfilação da expressão génica; Ciclo celular; Modelação da expressão

A inatividade transcricional e o elevado nível de condensação foram consideradas as mais emblemáticas características da heterocromatina constitutiva durante várias décadas. Contudo, na última década sucessivas evidências têm reportado que estas sequências de DNA repetitivo são transcritas, originando RNAs não codificantes (ncRNAs) com funções na organização e regulação dos genomas. A transcrição de sequências de satDNA centroméricas (CT) e pericentroméricas (PCT) nos genomas eucariotas é atualmente incontestável, contudo muitas questões permanecem por esclarecer: Como é a transcrição das sequências de satDNA efetivamente regulada? Sequências de satDNA teloméricas são também transcritas, à semelhança dos satélites CT e PCT? Quais as funções exatas dos transcritos satélite? Será essa função partilhada por todos os eucariotas? Ou apresentarão funções específicas e distintas de espécie para espécie? O trabalho desenvolvido nesta dissertação de mestrado teve como objetivo contribuir para o avanço do conhecimento nesta área. Pretendeu-se assim analisar o perfil de transcrição e os mecanismos de regulação da sequência de satDNA major do gato doméstico, FA-SAT, em dois genomas distintos. Apesar de inicialmente isolada a partir do genoma de Felis catus (Carnivora, Felidae), esta sequência é também partilhada com elevada similaridade pelo genoma da geneta (Genetta genetta: Carnivora, Viverridae). O estudo paralelo nestas duas espécies constitui uma estratégia inovadora para analisar uma mesma sequência de satDNA localizada em dois contextos cromossómicos distintos: telomérico no gato e (peri)centromérico na geneta. A análise da transcrição FA-SAT foi realizada por Real time RT-qPCR e RNA-FISH e permitiu definir o perfil transcricional da sequência FA-SAT nas duas espécies em estudo, tendo revelado pela primeira vez atividade transcricional de uma sequência de satDNA telomérica. A análise da localização celular dos transcritos FA-SAT em Felis catus e Genetta genetta revelou a presença de ncRNAs no nucléolo e dispersos no núcleo. A análise dos transcritos nascentes evidenciou que a transcrição da sequência ocorre aparentemente em mais do que um local na célula, sugerindo a existência de mais do que um tipo de transcritos FA-SAT. A determinação dos perfis de transcrição da sequência FA-SAT evidenciou que esta ocorre de forma dependente do ciclo celular, sugerindo uma associação entre a expressão FA-SAT e a progressão no ciclo, nas duas espécies. A acumulação de ncRNAs FA-SAT em estados de quiescência/senescência foi também detetada, sugerindo o envolvimento desta sequência na regulação de acontecimentos do ciclo celular e da saída de ciclo. Neste trabalho foram ainda analisados os mecanismos de regulação da expressão FA-SAT através da utilização do agente de desmetilação global do genoma 5’-azacitidina. A modelação da expressão da sequência sugeriu a existência de uma complexa via de regulação, envolvendo aparentemente vários mecanismos reguladores sinergéticos, diferentes nos dois genomas em análise. Finalmente, a deteção de alterações nos níveis de expressão FA-SAT em condições de stress específicas revelou resultados importantes acerca dos processos em que estes ncRNAs podem estar envolvidos. A integração de todos os resultados obtidos ao longo deste trabalho permitiu evidenciar a importância que a localização cromossómica pode ter no comportamento transcricional de uma sequência de satDNA e na função dos transcritos resultantes.