Efeito do grau de superenrolamento de plasmídeos na sua estabilidade estrutural e função biológica

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Lima, Joana Brissos Magalhães, 1984-
Data de Publicação: 2008
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10451/1816
Resumo: Tese de mestrado em Biologia (Biologia Molecular e Genética), apresentada à Universidade de Lisboa, através da Faculdade de Ciências, 2008
id RCAP_d51d41631ff6538827d9321f36e18ddc
oai_identifier_str oai:repositorio.ul.pt:10451/1816
network_acronym_str RCAP
network_name_str Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
repository_id_str 7160
spelling Efeito do grau de superenrolamento de plasmídeos na sua estabilidade estrutural e função biológicaBiologia molecularTeratia génicaVectores plasmídicosTese de mestrado em Biologia (Biologia Molecular e Genética), apresentada à Universidade de Lisboa, através da Faculdade de Ciências, 2008Actualmente, a utilização de DNA plasmídico (pDNA) como vector em Terapia génica, e em particular nas vacinas de DNA tem vindo a generalizar-se. Estas moléculas podem existir em diferentes conformações com diversos graus de superenrolamento. Várias evidências apontam para uma relação entre este superenrolamento e o sucesso das vacinas de DNA. O objectivo principal deste trabalho foi estudar o efeito do grau de superenrolamento na estabilidade estrutural e função biológica de plasmídeos destinados a terapia génica. Utilizaram-se seis plasmídeos todos derivados do vector comercial pVAX1/LacZ, três dos quais (pVAX1/GFP-BGH, pVAX1/GFP-SV40, pVAX1/GFP-Synt) contêm o gene que codifica a proteína repórter GFP (Green Fluorescent Protein) e os outros três (pVAX1/LacZ-BGH, pVAX1/LacZ-SV40, pVAX1/LacZ-Synt), o gene que codifica a proteína repórter ß-galactosidase. Dentro de cada grupo de três plasmídeos, as diferenças situam-se a nível das sequências de poliadenilação. A utilização de técnicas baseadas na electroforese em géis de agarose das séries completas de topoisómeros, permitiram a determinação do grau de superenrolamento dos plasmídeos utilizados como modelos de estudo. A análise estrutural dos mesmos, por electroforese bidimensional e espectroscopia de dicroísmo circular, não detectou qualquer transição estrutural ou conformação alterada. Estudou-se também a influência do superenrolamento na resistência dos plasmídeos à acção da nuclease S1 e verificou-se que os plasmídeos mais superenrolados são menos resistentes. Por fim, investigou-se o efeito do grau de superenrolamento na função biológica dos vectores plasmídicos e verificou-se que a isoforma superenrolada apresenta sempre percentagens de transfecção superiores à correspondente forma relaxada.The past decade has seen the use of plasmid DNA as a vector for gene therapy, in particular DNA Vaccines, broaden up. These therapeutic molecules may exist in several different conformations, and also in different degrees of supercoiling. Evidences show that there is a relation between the supercoiling and the vaccine's success. The scope of this research was to study the effect of different degrees of supercoiling in the structural stability and biological function of plasmid DNA, to be used in gene therapy. In order to do so, six model plasmids derived from the commercial pVax1/LacZ were used. Three of these plasmids (pVAX1/GFP-BGH, pVAX1/GFP-SV40, pVAX1/GFP-Synt) contained the reporter gene GFP (Green Fluorescent Protein) whereas, the other three (pVAX1/LacZ-BGH, pVAX1/LacZ-SV40, pVAX1/LacZ-Synt), contained the reporter gene ß-galactosidase. Within each group of the referred plasmids the differences lie specifically in the polyadenilation sequences. The use of tecniques based in agarose electrophoresis gels of all the series of topoisomers allowed to determine the degree of supercoiling of each of the plasmids used as a study model. Further structure analysis of the model plasmids by bidimensional electrophoresis and by circular dichroism has not detected any structural transition nor conformation change. The influence of supercoiling in the resistance to nucleases action was also studied, proving that the most supercoiled plasmids are more prone to the action of the S1 nuclease. Finally, the effect of the degree of supercoiling in the biological function of the DNA vaccines was also studied. The latter showed that the supercoiled isoforms of the model plasmids always presented higher transfection percentages than their corresponding relaxed isoform.Prazeres, Duarte Miguel de França Teixeira dosCorreia, Maria do Céu, 1951-Repositório da Universidade de LisboaLima, Joana Brissos Magalhães, 1984-2010-07-28T16:13:20Z20082008-01-01T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfapplication/pdftext/xmlhttp://hdl.handle.net/10451/1816porhttp://catalogo.ul.pt/F/?func=item-global&doc_library=ULB01&type=03&doc_number=000579998info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2023-11-08T15:41:48Zoai:repositorio.ul.pt:10451/1816Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-19T21:28:22.688728Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
dc.title.none.fl_str_mv Efeito do grau de superenrolamento de plasmídeos na sua estabilidade estrutural e função biológica
title Efeito do grau de superenrolamento de plasmídeos na sua estabilidade estrutural e função biológica
spellingShingle Efeito do grau de superenrolamento de plasmídeos na sua estabilidade estrutural e função biológica
Lima, Joana Brissos Magalhães, 1984-
Biologia molecular
Teratia génica
Vectores plasmídicos
title_short Efeito do grau de superenrolamento de plasmídeos na sua estabilidade estrutural e função biológica
title_full Efeito do grau de superenrolamento de plasmídeos na sua estabilidade estrutural e função biológica
title_fullStr Efeito do grau de superenrolamento de plasmídeos na sua estabilidade estrutural e função biológica
title_full_unstemmed Efeito do grau de superenrolamento de plasmídeos na sua estabilidade estrutural e função biológica
title_sort Efeito do grau de superenrolamento de plasmídeos na sua estabilidade estrutural e função biológica
author Lima, Joana Brissos Magalhães, 1984-
author_facet Lima, Joana Brissos Magalhães, 1984-
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Prazeres, Duarte Miguel de França Teixeira dos
Correia, Maria do Céu, 1951-
Repositório da Universidade de Lisboa
dc.contributor.author.fl_str_mv Lima, Joana Brissos Magalhães, 1984-
dc.subject.por.fl_str_mv Biologia molecular
Teratia génica
Vectores plasmídicos
topic Biologia molecular
Teratia génica
Vectores plasmídicos
description Tese de mestrado em Biologia (Biologia Molecular e Genética), apresentada à Universidade de Lisboa, através da Faculdade de Ciências, 2008
publishDate 2008
dc.date.none.fl_str_mv 2008
2008-01-01T00:00:00Z
2010-07-28T16:13:20Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/masterThesis
format masterThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv http://hdl.handle.net/10451/1816
url http://hdl.handle.net/10451/1816
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.relation.none.fl_str_mv http://catalogo.ul.pt/F/?func=item-global&doc_library=ULB01&type=03&doc_number=000579998
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
application/pdf
text/xml
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informação
instacron:RCAAP
instname_str Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informação
instacron_str RCAAP
institution RCAAP
reponame_str Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
collection Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
repository.name.fl_str_mv Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informação
repository.mail.fl_str_mv
_version_ 1799134167546462208

Registros relacionados