Nova abordagem no estudo da distrofia muscular das cinturas tipo 2A

• Autor(a) principal: Maia, Nuno Miguel da Silva
• Data de Publicação: 2011
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/8374
• topic: Biologia molecular; Distrofia muscular; Diagnóstico

As distrofias musculares são um grupo heterogéneo de doenças genéticas caracterizadas por fraqueza muscular progressiva. Até agora, foram mapeados 18 genes associados a um subgrupo específico de distrofias musculares denominado distrofias musculares das cinturas (limb-girdle muscular dystrophies, LGMD). As mutações no gene CAPN3 são responsáveis pelo fenótipo de calpainopatia ou distrofia muscular das cinturas tipo 2A (LGMD2A), uma das formas mais frequentes de LGMD. O gene CAPN3 codifica a proteína calpaína 3 (ou CAPN3), uma protease de cisteína dependente de cálcio, específica do músculo esquelético, regulada funcionalmente através da sua actividade autolítica. O mecanismo de patogénese da LGMD2A ainda não se encontra esclarecido, mas pensa-se que em grande parte esteja associado a défices funcionais da CAPN3. Com o presente trabalho, propõe-se uma nova abordagem de estudo no diagnóstico da LGMD2A combinando técnicas moleculares e análise de proteínas, no sentido de contribuir para um diagnóstico diferencial essencial na caracterização global de doentes com calpainopatia, especificamente nos casos de doentes com sintomas de distrofia muscular não específicos. Amostras de biópsia muscular de 9 doentes com LGMD2A, previamente estudados molecularmente, foram submetidos à análise de proteínas e testes funcionais através de western blotting e densitometria. Adicionalmente, foram efectuados estudos de expressão génica utilizando PCR em tempo real quantitativo. Uma análise global dos resultados obtidos permitiu: (a) completar o diagnóstico molecular efectuado nos doentes 2-7, incluindo a identificação de um defeito funcional da CAPN3 no caso do doente 3; (b) confirmar o diagnóstico clínico no doente 8 (com apenas uma mutação em heterozigotia), também causado pelo défice funcional da proteína; e (c) excluir o envolvimento da CAPN3 nos restantes 2 doentes com apenas um alelo mutado em heterozigotia, devido à elevada expressão observada para o gene CAPN3 comparativamente com as amostras controlo.