Caracterização fenotípica e genotípica de estirpes de fungos fitopatogénicos do género Phaeoacremonium

• Autor(a) principal: Alves, Artur Jorge da Costa Peixoto
• Data de Publicação: 2001
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/4358
• topic: Microbiologia molecular - Teses de mestrado; Genética vegetal; Videiras; Doenças das plantas; Fungos patogénicos

O síndroma da esca é uma das doenças mais destrutivas da videira (Vitis vinifera L.), estando disseminado pela grande maioria dos países onde tradicionalmente se cultiva a vinha, tendo sido já identificada em diversas regiões vitivinícolas de Portugal. Pensa-se que esta doença resulta da acção de diversos fungos actuando conjuntamente ou em sucessão. De entre estes, os mais frequentes são fungos mitospóricos do género Phaeoacremonium. Neste trabalho foram analisadas 14 estirpes deste género isoladas de videiras afectadas com esca e pertencentes às espécies P. chlamydosporum, P. aleophilum, P. angustius e P. viticola. Foram realizados estudos sobre alguns aspectos fisiológicos destas estirpes, nomeadamente a produção de enzimas extracelulares e sensibilidade a fungicidas. Todas as estirpes revelaram produzir actividade de protease, lipase, amilase, celulase, xilanase e pectinase. Adicionalmente as estirpes de P. aleophilum, P. angustius e P. viticola produzem lacase e pectato liase. Todas as estirpes revelaram também maior sensibilidade aos fungicidas tiabendazol e carbendazima, do que ao zirame e ao arsenito de sódio. Neste estudo foram ainda aplicados métodos moleculares no intuito de estabelecer metodologias que permitam uma identificação/classificação rápida e fidedigna de novos isolados, bem como a tipificação e avaliação do grau de diversidade genómica destes. Foram também aplicados métodos moleculares na tentativa de contribuir de algum modo para o esclarecimento da posição taxonómica deste género. Uma abordagem à separação do cariótipo destes organismos por electroforese em campo pulsado (PFGE) demonstrou que o cariótipo dos organismos classificados como P. chlamydosporum, é substancialmente diferente do cariótipo dos organismos pertencentes às restantes espécies. Métodos moleculares direccionados para regiões conservadas no genoma parecem ser os mais adequados para uma identificação ao nível da espécie. Assim, a análise de ribotipagem, utilizando a ER BamHI, e a amplificação da região ITS2 por PCR, seguida de digestão com a ER NciI (ITS-ARDRA) revelaram capacidade para aplicação na identificação de novos isolados. Os métodos de rep-PCR e MSP-PCR permitem a tipagem e avaliação do grau de diversidade genómica de isolados/estirpes. Os resultados da caracterização genotípica permitem verificar que a espécie P. chlamydosporum é muito diferente das espécies P. aleophilum, P. angustius e P. viticola, o que está de acordo com a sua reclassificação no novo género Phaeomoniella. De igual modo, e tal como descrito, os resultados obtidos indicam também que as espécies P. aleophilum e P. angustius são idênticas. Foi ainda clonado e sequenciado um fragmento de sintetase de quitina de cada uma das estirpes de P. chlamydosporum. Nas restantes espécies não foi possível detectar fragmentos homólogos a este. A análise da sequência nucleotídica e de a.a. deduzida revelou tratar-se de uma sintetase de quitina de classe I. A análise filogenética desta sequência mostra que P. chlamydosporum forma um grupo à parte das restantes espécies analisadas. De todas estas, P. chlamydosporum está aparentemente mais próxima de espécies de ascomicetos, tais como A. niger, A. nidulans, B. dermatitidis e H. capsulatum.