Extracção e identificação de proteínas possivelmente associadas à ocorrência de abortos espontâneos

• Autor(a) principal: Ferreira, Jorge Miguel Lourenço
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10348/5481
• topic: Proteómica; Aborto espontâneo; Eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE); Espectrometria de massas por ionização e dessorção a laser assistida por matriz (MALDI-TOF/MS)

Estudos indicam que cerca de 20% das gravidezes clínicas terminam em aborto espontâneo, principalmente durante o 1º semestre. Apesar de aproximadamente 55% dos mesmos se deverem a anomalias cromossómicas, torna-se essencial complementar as técnicas convencionais de prog- e diagnóstico. A análise proteómica pode desempenhar um papel crucial na abordagem desta problemática. A identificação de proteínas adversas (incluindo proteínas com modificações pós-traducionais) ao desenvolvimento embrionário em humanos pode elucidar as causas desta anomalia. Assim, este trabalho dividiu-se em três fases. A primeira que consistiu na optimização da extracção das proteínas presentes nos abortos, aliado à técnica de electroforese em gel de poliacrilamida na presença de dodecil sulfato de sódio (SDSPAGE, sodium dodecyl sulfate – polyacrylamide gel electrophoresis). A segunda fase consistiu na separação das mesmas por peso molecular e ponto isoeléctrico, através do procedimento de focalização isoeléctrica, seguido de electroforese em gel de poliacrilamida na presença de dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE x IEF, sodium dodecyl sulfate – polyacrylamide gel electrophoresis x isoelectric focusing) e, finalmente, procedeu-se à sua identificação por ionização e dessorção a laser assistida por matriz, com recurso ao tempo de voo (MALDI-TOF/TOF, Matrix-assisted laser desorption/ionization – Time of flight/ Mass Spectometry). Com base na técnica de MALDI-TOF/MS foi possível identificar 23 proteínas relacionadas com diversos processos destacando-se a glicólise, regulação do ciclo celular, mecanismos de tradução e angiogénese e resposta a stress. Através da identificação de proteínas como a HSP 70 e 90 e algumas variantes é possível, por exemplo, formular a hipótese de uma infecção bacteriana não detectada. As anti-HSPs produzidas podem ter afectado o crescimento do feto, dado que as mesmas são crucias no desenvolvimento inicial do embrião. Graças a este trabalho, a análise proteica revelou-se uma ferramenta de prog- e diagnóstico promissora nesta problemática, carecendo mais estudos, para que num futuro próximo a mesma se consiga conjugar com as actuais técnicas utilizadas.